| 查看: 2609 | 回复: 5 | |||
追风的人偶木虫 (小有名气)
呢喃的歌声
|
[求助]
电泳Marker分子量的归属问题已有1人参与
|
|
蛋白样品为Aβ1-42，单体分子量为4.5 KD。 凝胶用的是Tricine-SDS-PAGE，三层胶，厚度1.5 mm，自己配的。 （图1）电泳条件是70V，跑了大约15h，怕时间久了温度太高，所以用了冰浴。 显色方案是银染，用的碧云天的快速银染试剂盒，显色时间大概在10 min左右。 Marker用的分别是Thermo的26616和26632（图2）：其中26616是预染的，我用它来观察蛋白泳动的情况，标注的分子量应该没问题，染色前70 KD的条带是红色的，10 KD的条带是绿色的；26632是非预染的。 问题是26632指示的分子量该怎么对照： 1、如果按（图1）中（1）标注的，10、15、25 KD的条带跟26616的能对上，但是3.4和5 KD的条带不见了，是什么原因造成的？ （（图3）是猜想它俩跑出去了，换了1 mm厚度的胶来跑，70 V，4 .5h，好像下面也干干净净的，啥都没有）。 2、如果按（图1）中（2）标注的，从下往上依次标注，要怎么解释两种marker指示的分子量差别那么大？ 之前没怎么接触过电泳，最近才开始做，重复了好多次，都是差不多的结果，很困惑。请大家给咱指导一下，先谢谢了！  P50710-222121_副本_副本.jpg  P50722-145623_副本.jpg  P50715-195720_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
压汞仪和BET测气凝胶孔隙率
已经有4人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
博士申请
已经有3人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
-
投稿精细化工
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE凝胶电泳marker 大分子量条带消失
已经有8人回复
- SSR分子标记用变性聚丙烯酰胺电泳还是非变性聚丙烯酰胺电泳？
已经有4人回复
- sds-page跑电泳Marker为什么只跑出四条带
已经有6人回复
- 关于非变性电泳蛋白Marker
已经有1人回复
- 分子量marker条带异常
已经有2人回复
- Tricine SDS PAGE蛋白电泳的预染低分子量Marker哪个公司比较好？
已经有1人回复
- 小分子蛋白电泳marker
已经有15人回复
- Tris-Tricine SDS PAGE 电泳为何只跑出了marker?
已经有21人回复
- SDS-PAGE 电泳蛋白分子量飘移
已经有12人回复
- 我是个新手 想问问跑蛋白电泳的marker怎么选
已经有4人回复
- tricine-page电泳marker问题
已经有0人回复
- 【求助/交流】蛋白电泳 marker 选择？？？？
已经有4人回复
追风的人偶
木虫 (小有名气)
呢喃的歌声
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2140.8
- 帖子: 93
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 2550825
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
2楼2015-07-23 08:40:05
追风的人偶
木虫 (小有名气)
呢喃的歌声
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2140.8
- 帖子: 93
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 2550825
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
3楼2015-08-03 10:23:49
LG123456789
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 519.1
- 散金: 420
- 红花: 2
- 帖子: 62
- 在线: 124小时
- 虫号: 1465867
- 注册: 2011-10-28
- 专业: 疫苗学
4楼2015-09-14 15:28:00
追风的人偶
木虫 (小有名气)
呢喃的歌声
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2140.8
- 帖子: 93
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 2550825
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
|
我后来发现是我的负极buffer配错了，才跑不动。换了正确的跑，70V跑到夹层胶，再换120V跑到底，一共用了3个多小时。 第二块胶背景深是因为试剂盒里的银溶液用光了，就用了别人配的。平常我用乙醇：醋酸：水=50：10：40固定过夜后，用试剂盒染出来的背景是很浅的。 我现在在摸孵育的时间，文献上的孵育时间只能做参考。打算加了F12后4度孵育，在不同时间点取样，不离心，直接变性，看看它们的分子量分布，再决定下一步怎么处理它。 你说的啥都没有，我没遇到过，我之前即使是buffer配错了，也是有条带的。等我结果出来了以后，在接着讨论吧。寡聚体不好做，共勉！ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-09-15 14:42:24
追风的人偶
木虫 (小有名气)
呢喃的歌声
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2140.8
- 帖子: 93
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 2550825
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
|
不知道你参考的孵育方法是否跟我一样，我参考的是W.L.Klein的方法。看了一篇14年的文章，他实验室验证自己的方法，可以得到80kDa的球形寡聚体。你再做的时候，可以考虑一下这个情况，因为我用三层胶跑的时候，感觉70kDa往上的条带，都不怎么跑得进分离胶里来。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-09-16 09:04:51