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low-key

铜虫 (初入文坛)

[求助] 最近在研究蛋白复性,复性溶液一直为浑浊l,请教有什么方法可以溶解~~~ 已有4人参与

最近在研究蛋白复性,复性溶液中加入了L-精氨酸550mM、以及盐酸胍mM,其他都是可溶性盐类,但是溶液一直处于浑浊状态,大量颗粒不溶,加热到37℃震荡好几个小时也无效,请教有什么方法可以溶解~~~
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low-key

铜虫 (初入文坛)

自己先顶~~求高手们帮忙~~
2楼2015-07-14 14:32:48
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low-key

铜虫 (初入文坛)

没有人遇到这样的问题吗~~
3楼2015-07-15 10:45:50
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:40:03
可以电泳透析试一下,一般包涵体都很难复性为可溶的。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-07-15 10:52:27
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:40:31
复性?大量颗粒不溶解?

你是在变性溶解那一步就没有做好。

你可以@凌波丽,我们可以继续讨论,我现在是在饿了,我下线去吃饭。
5楼2015-07-16 13:54:46
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
干什么复性啊,直接融合蛋白,可溶性表达

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-07-16 17:33:12
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
前处理包涵体破碎效果怎么样,破碎是否完全?
还是说你在做包涵体复性时导致的蛋白出现沉淀?
如果是后者可根据以下方法来做:
复性中蛋白析出是怎么回事?该怎么处理?
出现蛋白析出,肯定是条件变化太剧烈了。
复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法,例如根据包涵体的溶液成分,每隔1个PH或浓度值配置一种溶液,逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低,条件温和,使蛋白质能够正确折叠。但是复性的比率应该很低。
若加变性剂尿素可加到2M,盐酸胍可加到1-1.5M;
另外可将甘油浓度增加,范围可在≤30%,且在复性样品中也可加适量甘油。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
7楼2015-07-17 10:32:22
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