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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近在研究蛋白复性，复性溶液一直为浑浊l，请教有什么方法可以溶解~~~
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low-key

铜虫 (初入文坛)

[求助] 最近在研究蛋白复性，复性溶液一直为浑浊l，请教有什么方法可以溶解~~~ 已有4人参与

最近在研究蛋白复性，复性溶液中加入了L-精氨酸550mM、以及盐酸胍mM，其他都是可溶性盐类，但是溶液一直处于浑浊状态，大量颗粒不溶，加热到37℃震荡好几个小时也无效，请教有什么方法可以溶解~~~
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1楼 2015-07-14 14:32:18
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low-key

铜虫 (初入文坛)
自己先顶~~求高手们帮忙~~
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2楼2015-07-14 14:32:48
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low-key

铜虫 (初入文坛)
没有人遇到这样的问题吗~~
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3楼2015-07-15 10:45:50
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:40:03
可以电泳透析试一下，一般包涵体都很难复性为可溶的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-07-15 10:52:27
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:40:31
复性？大量颗粒不溶解？

你是在变性溶解那一步就没有做好。

你可以@凌波丽，我们可以继续讨论，我现在是在饿了，我下线去吃饭。
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5楼2015-07-16 13:54:46
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
干什么复性啊，直接融合蛋白，可溶性表达

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2015-07-16 17:33:12
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
前处理包涵体破碎效果怎么样，破碎是否完全？
还是说你在做包涵体复性时导致的蛋白出现沉淀？
如果是后者可根据以下方法来做：
复性中蛋白析出是怎么回事？该怎么处理？
出现蛋白析出，肯定是条件变化太剧烈了。
复性应该采取复性液浓度和PH值逐渐变化的方法，例如根据包涵体的溶液成分，每隔1个PH或浓度值配置一种溶液，逐步透析到正常。此外透析时必须浓度极低，条件温和，使蛋白质能够正确折叠。但是复性的比率应该很低。
若加变性剂尿素可加到2M，盐酸胍可加到1-1.5M；
另外可将甘油浓度增加，范围可在≤30%，且在复性样品中也可加适量甘油。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-17 10:32:22
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