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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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linchenyu

铁虫 (小有名气)

[求助] 恳请各位大神帮忙分析这些傻傻看不懂的qRT PCR 结果

各位大神,我是qRT PCR的初学者,很多实验结果让我匪夷所思,急需找到原因,在此附上结果,恳请大家指点。实验对象: 肿瘤组织(C),正常组织(N);
组别设计为 C组,N组,NTC组(无模板组;  检测转录均为长链非编码RNA;  染料: TAKARA SYBR; 仪器:伯乐 CFX-96
问题:
(1) 8556 转录本的NTC组也有Ct值,并且溶解曲线的峰值和N组和C组的峰值是相同的,这是什么原因呢?(GAPDH 内参是正常的)
(2) 55736转录本的C组和N组溶解曲线的出峰位置不一样,C组是单峰,N组是双峰,为什么会出现双峰呢?难道P出来的不是相同的转录本么?可是我加的时候是将引物和染料混悬液一起混好,在分装的。(GAPDH 内参是没问题的)
(3) 415479 转录本所有组别的扩增曲线都出现一条类似于噪音信号的基线,所有组别都没有Ct值,而且溶解曲线也没有峰值,这可能是引物的问题么还是其他原因呢?(GAPDH 内参是正常的)
(4) 422438转录本的C组和N组的溶解曲线的峰值不一样,但是加的是相同的引物,这样的结果是什么原因导致的呢?(GAPDH 内参是正常的)
(5) 460164转录本的3个组别的Ct值很接近,溶解曲线的结果: N组和C组出现双峰,NTC在70-80处出现一个单峰,这可能是什么原因呢?(GAPDH 内参是正常的)
(6) 589379 转录本的所有组别的扩增曲线出现好几个坡,溶解曲线均为单峰,N组和C组峰值相同,NTC的峰值在其后,这种扩增曲线产生的原因会是引物的问题,还是其他原因呢?(GAPDH 内参是正常的)

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