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linchenyu铁虫 (小有名气)
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[求助]
恳请各位大神帮忙分析这些傻傻看不懂的qRT PCR 结果
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各位大神，我是qRT PCR的初学者，很多实验结果让我匪夷所思，急需找到原因 ，在此附上结果，恳请大家指点。实验对象: 肿瘤组织（C）,正常组织（N）；组别设计为 C组，N组，NTC组（无模板组; 检测转录均为长链非编码RNA; 染料： TAKARA SYBR； 仪器：伯乐 CFX-96 问题： (1) 8556 转录本的NTC组也有Ct值，并且溶解曲线的峰值和N组和C组的峰值是相同的，这是什么原因呢？(GAPDH 内参是正常的) (2) 55736转录本的C组和N组溶解曲线的出峰位置不一样，C组是单峰，N组是双峰，为什么会出现双峰呢？难道P出来的不是相同的转录本么？可是我加的时候是将引物和染料混悬液一起混好，在分装的。(GAPDH 内参是没问题的) (3) 415479 转录本所有组别的扩增曲线都出现一条类似于噪音信号的基线，所有组别都没有Ct值，而且溶解曲线也没有峰值，这可能是引物的问题么还是其他原因呢？(GAPDH 内参是正常的) (4) 422438转录本的C组和N组的溶解曲线的峰值不一样，但是加的是相同的引物，这样的结果是什么原因导致的呢？(GAPDH 内参是正常的) (5) 460164转录本的3个组别的Ct值很接近，溶解曲线的结果： N组和C组出现双峰，NTC在70-80处出现一个单峰，这可能是什么原因呢？(GAPDH 内参是正常的) (6) 589379 转录本的所有组别的扩增曲线出现好几个坡，溶解曲线均为单峰，N组和C组峰值相同，NTC的峰值在其后，这种扩增曲线产生的原因会是引物的问题，还是其他原因呢？(GAPDH 内参是正常的)  (1) 8556 .jpg  (1) 8556 M.jpg  (2) 55736 M.jpg  (2) 55736 .jpg  (3) 415479 .jpg  (3) 415479 M .jpg  (4) 422438 .jpg  (4) 422438 M.jpg  (5) 460164 .jpg  (5) 460164 M.jpg  (6) 589379 .jpg  (6) 589379 M.jpg |
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