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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物胞外聚合物的糖/蛋白测定
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)

[求助] 微生物胞外聚合物的糖/蛋白测定 已有1人参与

我的微生物胞外聚合物提制干粉后溶于水，苯酚硫酸测糖、考马斯亮蓝测蛋白含量只有30%和10%，哪位大神可以指点为什么这么低啊？我看文献里糖蛋白大部分都是80%-90%。我实在不知道里面其他60%是什么物质。。。还是我的测定方法有问题吗？
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1楼 2015-07-11 19:52:21
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiongjiong92: 金币+5, ★★★很有帮助, 给了一个新的思考方向，非常感谢！ 2015-08-13 20:23:30
eps里面很多是脂蛋白， 粘蛋白等疏水性蛋白。糖蛋白很少的。果胶含量也很高。你提取过程估计把很多脂溶性蛋白都剔除了。溶于水的蛋白本来就很少

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2楼2015-07-12 18:14:37
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-12 18:14:37
eps里面很多是脂蛋白， 粘蛋白等疏水性蛋白。糖蛋白很少的。果胶含量也很高。你提取过程估计把很多脂溶性蛋白都剔除了。溶于水的蛋白本来就很少

非常感谢您回复！前段时间因为放假没有关注。弱弱的问一下，脂溶性蛋白怎么提取呢？我做蛋白提取就是醇沉加透析，然后就冷冻干燥了
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3楼2015-08-13 20:06:28
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-12 18:14:37
eps里面很多是脂蛋白， 粘蛋白等疏水性蛋白。糖蛋白很少的。果胶含量也很高。你提取过程估计把很多脂溶性蛋白都剔除了。溶于水的蛋白本来就很少

你好，我觉得我对糖蛋白的纯化应该只是醇沉去除有机杂质，膜透析去除小分子物质，我又去查了一下，有几个不太明白的地方。1.本分硫酸法测糖含量应该是测的总糖吧，那么果胶水解后大部分应该是半乳糖醛酸，在苯酚法中不能够同时测定出来吗？如果必须用咔挫硫酸法测的话，那么咔挫硫酸法测的量是否会对总糖含量测定有影响呢？2.考马斯亮蓝法测定蛋白质是和蛋白质疏水区结合反应显色吧？那么是不是可以理解为不论是疏水性还是水溶性蛋白都能够被测定呢？如果不是的话，脂蛋白需要怎么处理才能测定到呢？
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4楼2015-08-13 21:03:07
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiongjiong92 at 2015-08-13 21:03:07
你好，我觉得我对糖蛋白的纯化应该只是醇沉去除有机杂质，膜透析去除小分子物质，我又去查了一下，有几个不太明白的地方。1.本分硫酸法测糖含量应该是测的总糖吧，那么果胶水解后大部分应该是半乳糖醛酸，在苯酚法 ...

你的目标是提蛋白还是测成分？
脂蛋白可以用尿素型蛋白溶解液提取，但是该法提的是全蛋白。要提纯用0.4%DTT的丙酮沉降过夜，离心重悬就好了啊。果胶跟果糖是不一样的。测定方法我不知道，得查文献
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5楼2015-08-14 09:20:13
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)
我的目标是要测定eps的成份，分析糖和蛋白质占多少，但是测来测去都不到50%，导师说这样写到文章里肯定没有说服力，所以很愁啊，不知道哪里出了问题

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6楼2015-08-15 08:25:39
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-08-14 09:20:13
你的目标是提蛋白还是测成分？
脂蛋白可以用尿素型蛋白溶解液提取，但是该法提的是全蛋白。要提纯用0.4%DTT的丙酮沉降过夜，离心重悬就好了啊。果胶跟果糖是不一样的。测定方法我不知道，得查文献...

我的目标是要测定eps的成份，分析糖和蛋白质占多少，但是测来测去都不到50%，导师说这样写到文章里肯定没有说服力，所以很愁啊，不知道哪里出了问题

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7楼2015-08-15 08:27:24
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jiongjiong92 at 2015-08-15 08:27:24
我的目标是要测定eps的成份，分析糖和蛋白质占多少，但是测来测去都不到50%，导师说这样写到文章里肯定没有说服力，所以很愁啊，不知道哪里出了问题
...

你查查文献吧。这肯定是方法不合适。我记得以前学校里面做的时候果胶和脂蛋白成分是比较高的。不是我做，我也不知道有啥好办法。文献里面写的很详细的

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8楼2015-08-16 21:41:03
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jiongjiong92

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-08-16 21:41:03
你查查文献吧。这肯定是方法不合适。我记得以前学校里面做的时候果胶和脂蛋白成分是比较高的。不是我做，我也不知道有啥好办法。文献里面写的很详细的
...

就是参考文献做的，总是测的值很低，感觉应该是哪里有问题。不过还是谢谢了！

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9楼2015-08-16 23:28:56
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

果胶和蛋白，肯定不能直接溶于水的。继续查文献吧，第一步就不对。
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10楼2015-08-17 08:32:53
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