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求助：活性污泥胞外聚合物提取 已有2人参与
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| 本人大三，申请了一个实验项目。老师给的是做活性污泥胞外聚合物方面的实验。自己查了挺多文献的，提取实验也做了，但提取出来的量非常少，而且只是提取液，自己以为能提取出固体的聚合物。现在求助各位有经验的前辈传授一下经验，有没有比较完美的提取方法，最后提取出来的聚合物可不可以是固态的，提取的量怎么样？？不胜感激！！ |
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fei763
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2楼2014-12-01 09:49:48
【答案】应助回帖
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| (1)胞外聚合物的提取 胞外聚合物（Extracelluler Polymer Substances, EPS）与细胞结合紧密，需要特定的方法才能将其从污泥中分离提出。在本实验中采用Frølund等人的方法来提取活性污泥表面的胞外聚合物。 首先，从反应器中取50mL活性污泥样品，在2000g、室温下离心15min后倒出上清液。离心后再向留在离心管内的生物体加入由526mg•L-1 NaCl，74.56mg•L-1KCl，760.2mg•L-1Na3PO4和552mg•L-1NaH2PO4组成的磷酸盐缓冲溶液，使之再次呈悬浮液态。再将悬浮污泥样品移入烧杯中，在其中加入90g•gMLVSS-1的离子交换树脂（732阳离子交换树脂）并以600rpm转速搅拌2h，使之混合。混合后再于4000g离心300min以去除树脂和生物体，上清液则为EPS提取液。 (2)胞外聚合物的分析方法 EPS提取物中主要是多糖、蛋白质和DNA。多糖的测定采用蒽酮—H2SO4比色法。即高温下糖类会被H2SO4脱水生成糠醛或糠醛衍生物，并与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物，在620nm处测定吸光度（721型分光光度计），以葡萄糖的标准曲线可换算出多糖的含量。 蛋白质采用紫外吸收法测定，同时测定260nm和280nm处的吸光度，利用下式计算蛋白质的浓度(mg•mL-1)：ρ蛋白质=1.45×A280nm-0.74×A260nm，该方法可消除样品中和算对测定值的干扰。EPS的含量最终以单位质量MLVSS中各成分的总量计。 DNA的测定采用修正的Brunk方法，主要试剂为：用100 mM NaCl中配制0.2 ppm DAPI试剂 (4, 6-二咪基-2-苯基吲哚)，10 mM EDTA，10 mM TRIS，pH 7。步骤: 将100 μL的 EPS 提取液用吸液管装入试管中并加入2.5 ml上述试剂。直接测定样品（激发波长360nm、发射波长450 nm），Salmon实验采用标准方法。 |
3楼2014-12-01 10:12:16
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fei763
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