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水样提取总DNA求助 已有4人参与
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| 想从采的地表水中提取总DNA，但是水样中的微生物量应该比较低，水样也不是很多只有200多毫升。请问大神，要提取总DNA的话大概要用多少水？怎样提取效率比较高？先37℃摇24小时，微生物量会增加么？ |
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Neo2000
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2楼2015-07-09 21:00:03
lemian
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【答案】应助回帖
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用0.2微米滤膜“抽滤”水样即可。微生物会截留在滤膜上，滤膜要冷冻保存，用的时候在无菌操作台里将滤膜剪成小碎片放入灭菌离心管待提取DNA。水样如果用于提取DNA，采样后需尽快过滤，如不能立即过滤，水样应冷藏，在几小时内完成过滤，所以你说培养是万万不行的。抽滤多少水要看情况，水体营养程度较低需多过滤些，较高可少过滤些。地表水一般情况下200 mL也是可以的，你过滤完以后提取下DNA，测下浓度，一般至少需要浓度在20 ng/uL以上，否则很难进行下游实验，例如PCR。你可以用试剂盒提取DNA，效率还是比较高的。建议你多看下相关文献！ http://www.nature.com/ismej/jour ... l/ismej201529a.html |
10楼2015-07-11 14:56:13
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fengjunchen
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fengjunchen
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