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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位虫友，我最近在克隆某基因的CDS区，但是它有3.5kb左右，总是P不出来
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俊松ing

木虫 (知名作家)

[求助] 各位虫友，我最近在克隆某基因的CDS区，但是它有3.5kb左右，总是P不出来 已有5人参与

各位虫友，我最近在克隆某基因的CDS区，但是它有3.5kb左右，总是P不出来，换了各种模板都不行。我该怎么办？有没有推荐的RT试剂盒或者什么方法啊？求教！
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如果你有梦想、全世界都会帮你实现
1楼 2015-07-08 10:33:59
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lws9930

至尊木虫 (职业作家)
试一试overlap PCR吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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俊松ing
10楼2015-07-12 12:06:16
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俊松ing

木虫 (知名作家)
自己先顶一下！大家来帮忙啊！
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如果你有梦想、全世界都会帮你实现
2楼2015-07-08 10:34:36
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:47:55
首先你要保证提的RNA和反转的CDNA质量好，无降解。如果能知道这个基因在哪个组织或是条件下表达高就用那个样品的cDNA最好了。然后买一个扩长片段的PCR酶，试剂代理商肯定有卖的。
祝好运，求金币。
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植物学
3楼2015-07-08 16:40:17
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:48:08
什么材料？RNA好不好，引物设计过关了没？这些都是关键

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-07-08 18:06:13
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