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俊松ing

木虫 (知名作家)

[求助] 各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来 已有5人参与

各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来,换了各种模板都不行。我该怎么办?有没有推荐的RT试剂盒或者什么方法啊?求教!
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:47:55
首先你要保证提的RNA和反转的CDNA质量好,无降解。如果能知道这个基因在哪个组织或是条件下表达高就用那个样品的cDNA最好了。然后买一个扩长片段的PCR酶,试剂代理商肯定有卖的。
祝好运,求金币。
植物学
3楼2015-07-08 16:40:17
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俊松ing

木虫 (知名作家)

自己先顶一下!大家来帮忙啊!
如果你有梦想、全世界都会帮你实现
2楼2015-07-08 10:34:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:48:08
什么材料?RNA好不好,引物设计过关了没?这些都是关键

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-07-08 18:06:13
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俊松ing

木虫 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nonglong1 at 2015-07-08 16:40:17
首先你要保证提的RNA和反转的CDNA质量好,无降解。如果能知道这个基因在哪个组织或是条件下表达高就用那个样品的cDNA最好了。然后买一个扩长片段的PCR酶,试剂代理商肯定有卖的。
祝好运,求金币。

不知道怎么查基因在组织中的表达量,现在只能在实验室已有的细胞系里面试,怎么办?要不要westernblot检测一下不同细胞系这一基因的本底表达量?
如果你有梦想、全世界都会帮你实现
5楼2015-07-08 18:52:24
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