24小时热门版块排行榜    

查看: 2435  |  回复: 8

燕子1314

金虫 (初入文坛)

[求助] sf9细胞的转染 已有4人参与

最近在做sf9细胞的转染,用的是pFastBacDual这个载体,问问各位大侠这个载体可以直接转细胞吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没听说过,一般都应该是将pfastdual先导入到DH10bac里,形成重组bacmid DNA之后提取bacmid DNA将其导入到sf9细胞吧
2楼2015-06-25 15:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子1314

金虫 (初入文坛)

可是pfastdual不是一个表达载体吗,按理说应该能表达呀
3楼2015-06-25 16:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是,dual不含有Gus 或CAT基因不能表达重组杆状病毒,导入到DH10bac里,能产生重组bacmid,bacmid里含有表达基因,才能转染细胞。网上有具体的bac to bac 表达系统 user guide 参照那个来做吧
4楼2015-06-26 16:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。
5楼2015-06-27 13:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子1314

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2015-06-27 13:05:35
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。

由于pfastbacdual有两个启动子,文献报道p10启动子必须得有病毒的某些基因产物来激发启动,那如果用病毒先侵染细胞几小时然后再转染,这样是否可行,大侠们再给我提提意见吧
6楼2015-06-30 09:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

细胞转染的话,首先是选择转染方法(瞬时转染稳定转染),其次选择转染试剂,不过应该都是可以转进去的吧。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-08-19 10:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝日星空

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接转,怎么转?
8楼2015-08-21 08:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czbd2016

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人感觉做瞬时转染会好做一点,试剂选择的话肯定是需要选择转染率高,细胞毒性小的。最近好几个同学都跟我推荐用RFect PM转染试剂,我也打算试试
9楼2018-11-27 09:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 燕子1314 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 335求调剂 +3 yuyu宇 2026-03-23 4/200 2026-03-23 19:03 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 材料与化工考研调剂 +4 孅華 2026-03-22 4/200 2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 14/700 2026-03-23 14:37 by 15614359529
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见