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燕子1314

金虫 (初入文坛)

[求助] sf9细胞的转染 已有4人参与

最近在做sf9细胞的转染,用的是pFastBacDual这个载体,问问各位大侠这个载体可以直接转细胞吗?
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是,dual不含有Gus 或CAT基因不能表达重组杆状病毒,导入到DH10bac里,能产生重组bacmid,bacmid里含有表达基因,才能转染细胞。网上有具体的bac to bac 表达系统 user guide 参照那个来做吧
4楼2015-06-26 16:21:48
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没听说过,一般都应该是将pfastdual先导入到DH10bac里,形成重组bacmid DNA之后提取bacmid DNA将其导入到sf9细胞吧
2楼2015-06-25 15:32:01
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燕子1314

金虫 (初入文坛)

可是pfastdual不是一个表达载体吗,按理说应该能表达呀
3楼2015-06-25 16:32:58
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。
5楼2015-06-27 13:05:35
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