24小时热门版块排行榜    

查看: 2602  |  回复: 8

燕子1314

金虫 (初入文坛)

[求助] sf9细胞的转染 已有4人参与

最近在做sf9细胞的转染,用的是pFastBacDual这个载体,问问各位大侠这个载体可以直接转细胞吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没听说过,一般都应该是将pfastdual先导入到DH10bac里,形成重组bacmid DNA之后提取bacmid DNA将其导入到sf9细胞吧
2楼2015-06-25 15:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子1314

金虫 (初入文坛)

可是pfastdual不是一个表达载体吗,按理说应该能表达呀
3楼2015-06-25 16:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是,dual不含有Gus 或CAT基因不能表达重组杆状病毒,导入到DH10bac里,能产生重组bacmid,bacmid里含有表达基因,才能转染细胞。网上有具体的bac to bac 表达系统 user guide 参照那个来做吧
4楼2015-06-26 16:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。
5楼2015-06-27 13:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子1314

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2015-06-27 13:05:35
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。

由于pfastbacdual有两个启动子,文献报道p10启动子必须得有病毒的某些基因产物来激发启动,那如果用病毒先侵染细胞几小时然后再转染,这样是否可行,大侠们再给我提提意见吧
6楼2015-06-30 09:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

细胞转染的话,首先是选择转染方法(瞬时转染稳定转染),其次选择转染试剂,不过应该都是可以转进去的吧。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-08-19 10:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝日星空

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接转,怎么转?
8楼2015-08-21 08:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czbd2016

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人感觉做瞬时转染会好做一点,试剂选择的话肯定是需要选择转染率高,细胞毒性小的。最近好几个同学都跟我推荐用RFect PM转染试剂,我也打算试试
9楼2018-11-27 09:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 燕子1314 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见