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燕子1314

金虫 (初入文坛)

[求助] sf9细胞的转染 已有4人参与

最近在做sf9细胞的转染,用的是pFastBacDual这个载体,问问各位大侠这个载体可以直接转细胞吗?
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没听说过,一般都应该是将pfastdual先导入到DH10bac里,形成重组bacmid DNA之后提取bacmid DNA将其导入到sf9细胞吧
2楼2015-06-25 15:32:01
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燕子1314

金虫 (初入文坛)

可是pfastdual不是一个表达载体吗,按理说应该能表达呀
3楼2015-06-25 16:32:58
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是,dual不含有Gus 或CAT基因不能表达重组杆状病毒,导入到DH10bac里,能产生重组bacmid,bacmid里含有表达基因,才能转染细胞。网上有具体的bac to bac 表达系统 user guide 参照那个来做吧
4楼2015-06-26 16:21:48
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。
5楼2015-06-27 13:05:35
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燕子1314

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2015-06-27 13:05:35
pfastbac仅仅是穿梭质粒,方便你把外源基因导入,通过在DH10BAC菌株里完成同源重组,将你的目的基因整合到bacmid,进一步通过蓝白斑筛选,筛选出阳性克隆,抽提bacmid,再进行转染。

由于pfastbacdual有两个启动子,文献报道p10启动子必须得有病毒的某些基因产物来激发启动,那如果用病毒先侵染细胞几小时然后再转染,这样是否可行,大侠们再给我提提意见吧
6楼2015-06-30 09:38:40
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

细胞转染的话,首先是选择转染方法(瞬时转染稳定转染),其次选择转染试剂,不过应该都是可以转进去的吧。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-08-19 10:58:07
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蓝日星空

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接转,怎么转?
8楼2015-08-21 08:42:48
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czbd2016

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人感觉做瞬时转染会好做一点,试剂选择的话肯定是需要选择转染率高,细胞毒性小的。最近好几个同学都跟我推荐用RFect PM转染试剂,我也打算试试
9楼2018-11-27 09:43:57
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