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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Bac-to-bac杆状病毒表达系统
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马海云

金虫 (小有名气)

[求助] Bac-to-bac杆状病毒表达系统 已有4人参与

我最近在用这个系统做蛋白表达，提取杆粒测得DNA浓度也在几百纳克每微升，但转染到细胞后，就是没表达，这是怎么回事呢？可能的原因有哪些？请大家帮忙解答下，万分感谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-12-22 09:35:29
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是怎么提取的BACMID？我们提出来都是几千甚至上万的浓度，然后才做的转染。
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2楼2014-12-22 12:48:58
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鱼大喵

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转染现象明显吗？用的什么细胞啊？
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3楼2014-12-22 17:02:19
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马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鱼大喵 at 2014-12-22 17:02:19
转染现象明显吗？用的什么细胞啊？

我用的Tn 细胞，拿p1来检测的
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4楼2014-12-25 12:06:20
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马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 李小同 at 2014-12-22 12:48:58
你是怎么提取的BACMID？我们提出来都是几千甚至上万的浓度，然后才做的转染。

就是用的英俊的试剂盒提的啊
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5楼2014-12-25 12:07:18
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鱼大喵

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

西门吹雪170: 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:29:09
引用回帖:
4楼: Originally posted by 马海云 at 2014-12-25 12:06:20
我用的Tn 细胞，拿p1来检测的...

bacmid浓度有点低，我们用的量至少1微克。不过有时P1确实检测不到，到了P2 P3才能检测到。你要不重新用多点染，要不接下去做，看P2 P3的表达情况。
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6楼2014-12-25 13:38:34
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马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 鱼大喵 at 2014-12-25 13:38:34
bacmid浓度有点低，我们用的量至少1微克。不过有时P1确实检测不到，到了P2 P3才能检测到。你要不重新用多点染，要不接下去做，看P2 P3的表达情况。...

是的  我就在接着下去 看P2  然后又重新把量提上来做一遍，希望会有好结果吧    对了，这个bacmid你们提取后有没有的检测一下的啊？
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7楼2014-12-26 10:27:34
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鱼大喵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 马海云 at 2014-12-26 10:27:34
是的  我就在接着下去 看P2  然后又重新把量提上来做一遍，希望会有好结果吧    对了，这个bacmid你们提取后有没有的检测一下的啊？...

有啊，用酶标仪检测量和纯度
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8楼2014-12-26 20:36:10
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马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 鱼大喵 at 2014-12-26 20:36:10
有啊，用酶标仪检测量和纯度...

酶标仪测量？怎么弄
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9楼2014-12-28 08:35:26
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喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

bacmid提取后做一个酶切，0.7%的胶，100v跑跑看，验证一下，有可能提取的不是bacmid呢，我遇到过一次

[ 发自小木虫客户端 ]
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学海无涯懂做舟
10楼2014-12-28 09:12:31
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