应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Bac-to-bac杆状病毒表达系统
162/2返回列表上一页12
查看: 2473  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 喜气洋洋 at 2014-12-28 09:12:31
bacmid提取后做一个酶切，0.7%的胶，100v跑跑看，验证一下，有可能提取的不是bacmid呢，我遇到过一次

这个酶就是设计目的基因带的酶切位点的那个酶吗？
赞一下 回复此楼
11楼2014-12-29 08:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
马海云: 金币+1, ★有帮助 2015-01-13 09:57:50
提取BACMID后我们都是要用M13引物再检测一遍的，跑胶很难看见东西，都是HELPER
赞一下 回复此楼
12楼2014-12-29 16:39:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 马海云 at 2014-12-29 08:35:05
这个酶就是设计目的基因带的酶切位点的那个酶吗？...

EcoR1,Hind3单酶切，也可以pcr看看

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
学海无涯懂做舟
13楼2014-12-29 21:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjy108

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
马海云: 金币+5 2015-01-13 09:58:01
重组的bacmid浓度确实低，提取之后我们一般用PCR检测，确定目标基因重组上去之后做转染。可以适当延长P1的收毒时间，多培养几天，然后扩增制备P2、P3，使用滴度合适的病毒代次，蛋白表达量低的话可以增加表达体系的量或者提高细胞密度。
赞一下 回复此楼
silly stupid Ph.D candidate
14楼2015-01-12 19:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dalian0725

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 喜气洋洋 at 2014-12-29 21:53:28
EcoR1,Hind3单酶切，也可以pcr看看
...

同学，我现在在做用Bac-to-Bac表达蛋白，但是做到提取杆粒转染昆虫细胞sf9的时候就老失败，不知道是哪方面的原因。
我用的载体是pFastBac1，用碱裂解的方法手提杆粒，但是有四五条带，在最下边还有特别亮的RNA带。然后采用脂质体转染Sf9，转染时培养液用的是无抗无血清的Grace培养液。（Grace培养液是有Grace’s insect cell culture medicine粉末，水解乳蛋白 ，酵母浸出液，碳酸氢钠配制而成）。
那你是怎么做的呢
赞一下 回复此楼
15楼2015-11-21 19:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dalian0725

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wangjy108 at 2015-01-12 19:55:21
重组的bacmid浓度确实低，提取之后我们一般用PCR检测，确定目标基因重组上去之后做转染。可以适当延长P1的收毒时间，多培养几天，然后扩增制备P2、P3，使用滴度合适的病毒代次，蛋白表达量低的话可以增加表达体系的 ...

同学，我现在在做用Bac-to-Bac表达蛋白，但是做到提取杆粒转染昆虫细胞sf9的时候就老失败，不知道是哪方面的原因。
我用的载体是pFastBac1，用碱裂解的方法手提杆粒，但是有四五条带，在最下边还有特别亮的RNA带。然后采用脂质体转染Sf9，转染时培养液用的是无抗无血清的Grace培养液。（Grace培养液是有Grace’s insect cell culture medicine粉末，水解乳蛋白 ，酵母浸出液，碳酸氢钠配制而成）。
你是怎么做的？你觉得我是啥有问题呢？
赞一下 回复此楼
16楼2015-11-21 19:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 马海云 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 3/150 2026-11-11 09:07 by 1Nb0IVlmV6v0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 07:06 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 07:03 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:40 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:29 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:07 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:02 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭