应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Bac-to-bac杆状病毒表达系统
162/2返回列表上一页12
查看: 2282  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 喜气洋洋 at 2014-12-28 09:12:31
bacmid提取后做一个酶切，0.7%的胶，100v跑跑看，验证一下，有可能提取的不是bacmid呢，我遇到过一次

这个酶就是设计目的基因带的酶切位点的那个酶吗？
赞一下 回复此楼
11楼2014-12-29 08:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
马海云: 金币+1, ★有帮助 2015-01-13 09:57:50
提取BACMID后我们都是要用M13引物再检测一遍的，跑胶很难看见东西，都是HELPER
赞一下 回复此楼
12楼2014-12-29 16:39:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 马海云 at 2014-12-29 08:35:05
这个酶就是设计目的基因带的酶切位点的那个酶吗？...

EcoR1,Hind3单酶切，也可以pcr看看

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
学海无涯懂做舟
13楼2014-12-29 21:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjy108

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
马海云: 金币+5 2015-01-13 09:58:01
重组的bacmid浓度确实低，提取之后我们一般用PCR检测，确定目标基因重组上去之后做转染。可以适当延长P1的收毒时间，多培养几天，然后扩增制备P2、P3，使用滴度合适的病毒代次，蛋白表达量低的话可以增加表达体系的量或者提高细胞密度。
赞一下 回复此楼
silly stupid Ph.D candidate
14楼2015-01-12 19:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dalian0725

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 喜气洋洋 at 2014-12-29 21:53:28
EcoR1,Hind3单酶切，也可以pcr看看
...

同学，我现在在做用Bac-to-Bac表达蛋白，但是做到提取杆粒转染昆虫细胞sf9的时候就老失败，不知道是哪方面的原因。
我用的载体是pFastBac1，用碱裂解的方法手提杆粒，但是有四五条带，在最下边还有特别亮的RNA带。然后采用脂质体转染Sf9，转染时培养液用的是无抗无血清的Grace培养液。（Grace培养液是有Grace’s insect cell culture medicine粉末，水解乳蛋白 ，酵母浸出液，碳酸氢钠配制而成）。
那你是怎么做的呢
赞一下 回复此楼
15楼2015-11-21 19:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dalian0725

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wangjy108 at 2015-01-12 19:55:21
重组的bacmid浓度确实低，提取之后我们一般用PCR检测，确定目标基因重组上去之后做转染。可以适当延长P1的收毒时间，多培养几天，然后扩增制备P2、P3，使用滴度合适的病毒代次，蛋白表达量低的话可以增加表达体系的 ...

同学，我现在在做用Bac-to-Bac表达蛋白，但是做到提取杆粒转染昆虫细胞sf9的时候就老失败，不知道是哪方面的原因。
我用的载体是pFastBac1，用碱裂解的方法手提杆粒，但是有四五条带，在最下边还有特别亮的RNA带。然后采用脂质体转染Sf9，转染时培养液用的是无抗无血清的Grace培养液。（Grace培养液是有Grace’s insect cell culture medicine粉末，水解乳蛋白 ，酵母浸出液，碳酸氢钠配制而成）。
你是怎么做的？你觉得我是啥有问题呢？
赞一下 回复此楼
16楼2015-11-21 19:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 马海云 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 7/350 2026-05-23 16:57 by articlefan
[基金申请] 揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[论文投稿] 投MDPI的三个期刊都被桌拒 +4 木虫研究牲 2026-05-17 5/250 2026-05-23 14:44 by 期刊投稿求助
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 6/300 2026-05-23 14:32 by tfang
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +3 zju2000 2026-05-21 4/200 2026-05-23 08:33 by xli1984
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +27 国自然国社科中 2026-05-17 28/1400 2026-05-22 16:25 by hunter无悔
[论文投稿] 投稿求助，期刊 +4 希冀，有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀，有书读
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +7 jyang1999 2026-05-16 8/400 2026-05-21 08:50 by 能丫
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 6/300 2026-05-21 01:37 by 17520222914
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭