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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA测组织样本时裂解液的选择
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15150681606

银虫 (小有名气)

[求助] ELISA测组织样本时裂解液的选择已有2人参与

我要做PIIINP的elisa，双抗体夹心。我希望测小鼠心脏，说明书上说用PBS匀浆。
但我前面为了测Caspase-3活性，使用了碧云天Caspase-3活性试剂盒自带的裂解液把心脏匀浆并离心取了上清，
那么问题来了：这些上清液可以直接做elisa么？会有影响么？
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1楼2015-06-23 14:24:41
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定蛋白在上清里面吗？要是确定的话，可以做。
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生命在于运动
2楼2015-06-23 16:02:10
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绯红誓言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是裂解液上清的话，建议先用ＢＣＡ测一下总蛋白浓度，跑个ＳＤＳ－ｐａｇｅ确定一下目的蛋白是否存在，以及大概的量和浓度。
对于他是否能直接用在夹心ELISA中，这取决于你提取的上清中是否存在影响夹心ＥＬＩＳＡ中其他组份的物质。譬如说有些酶会对ＨＲＰ起催化作用，有些试剂会抑制ＨＲＰ活性等等！
这个试一下就知道了！没人能凭经验就告诉你，试了就是你的经验！
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3楼2015-06-23 22:58:21
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15150681606

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by swlsangon at 2015-06-23 16:02:10
你确定蛋白在上清里面吗？要是确定的话，可以做。

做过考马斯亮蓝定量。。
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4楼2015-06-24 09:22:38
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