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汕头大学海洋科学接受调剂
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旭竹0907

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 抗体特异性检测方法 已有1人参与

请教各位大侠，文章中，reviewer 问 How was the specificity of the antibody evaluated? Cross reactivity, non-specific binding etc? 如何回答，有没有相关文献支持啊！另外， 刚做好的抗体，如何检测其特异性和效价。谢谢！
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谁能要耐得住寂寞谁就能成就梦想
1楼 2014-05-25 16:09:22
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-25 23:04:29
抗体是自己做的吗？从公司买的话的是有资料的
自己做的话，效价的测定需要间接ELISA测定，按比例稀释抗体，同时做个阴性对照，只要稀释比的OD值大于阴性的2倍就认定它是阳性，这个就是效价，特异性的检测你需要找个细胞株做成裂解液，WB看看有没有杂带
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星陈代谢
2楼2014-05-25 20:19:11
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旭竹0907

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kx444555 at 2014-05-25 20:19:11
抗体是自己做的吗？从公司买的话的是有资料的
自己做的话，效价的测定需要间接ELISA测定，按比例稀释抗体，同时做个阴性对照，只要稀释比的OD值大于阴性的2倍就认定它是阳性，这个就是效价，特异性的检测你需要找个 ...

您好！感谢您的回复，抗体是我们自己做的，我们做WB检测了，因为是多抗，有杂带，购买的抗体也一样，原因可能是因为这个蛋白有多个isoform。再请教一下，间接ELISA测定方法有protocol，及相关文献支持么，请发一份给我，谢谢！
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谁能要耐得住寂寞谁就能成就梦想
3楼2014-05-25 21:24:42
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
旭竹0907: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2014-05-27 18:06:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by 旭竹0907 at 2014-05-25 21:24:42
您好！感谢您的回复，抗体是我们自己做的，我们做WB检测了，因为是多抗，有杂带，购买的抗体也一样，原因可能是因为这个蛋白有多个isoform。再请教一下，间接ELISA测定方法有protocol，及相关文献支持么，请发一份 ...

1 有杂带也是正常的，要确定那一条是特异性条带，你最好用你的蛋白把血清BLOCK一下做阴性对照，然后正常血清跟BLOCD后的血清同时做WB，如BLOCK后的在预测位置变弱或者没有了，就说明这条带是特异性的，
2 效价的测定的通用方法都是这样的，文献暂时没有，你上GOOGLE学术上搜索一下吧
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星陈代谢
4楼2014-05-26 08:36:22
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旭竹0907

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kx444555 at 2014-05-26 08:36:22
1 有杂带也是正常的，要确定那一条是特异性条带，你最好用你的蛋白把血清BLOCK一下做阴性对照，然后正常血清跟BLOCD后的血清同时做WB，如BLOCK后的在预测位置变弱或者没有了，就说明这条带是特异性的，
2 效价的测 ...

非常感谢！
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谁能要耐得住寂寞谁就能成就梦想
5楼2014-05-27 18:07:29
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