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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑出来的PCR结果一直是这样的，不知各位大虾可否指点指点，多谢多谢
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
王小燕30(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:46:51
引用回帖:
20楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-17 22:27:18
这个图。。。。。。。太壮观了，倚天出鞘啊！
言归正传。你这个应该是胶的问题，即使PCR失败或者模板有问题也不应该是这种情况；建议按如下步骤排查：
1、直接用模板DNA跑电泳或者其他正常扩增的小片段PCR产物（小 ...

没仔细看，marker还是挺好的，PCR产物跑成这样还真是头一次见呢，这个带这么亮，是不是模板太多了，我们做的PCR，模板终浓度是1 ng/uL到5 ng/uL之间的，你试试，然后可以降低引物浓度，预变性时间延长，第一次见，我能想到的就这些啦
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王小燕30
没有做不到，只有想不到！
21楼2015-06-17 22:33:40
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wangs2004

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 王小燕30 at 2015-06-17 22:13:11
估计是模版不好了...

加油吧小建议,别拿枪混得太厉害,或者就不混,用手指弹弹管底就好了
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22楼2015-06-18 00:34:43
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by 王小燕30 at 2015-06-17 22:14:26
这个胶的浓度可以跑出我的marker呢，...

你先重新按我说的浓度试试看结果如何？
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实验忙碌中
23楼2015-06-18 08:45:35
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:46:15
你的模板是12000-13000bp，还有人让你用2%的胶，2%的胶只能分离50-2000bp的模板，兼职是笑话，正确的胶浓度应该是0.5%，还有你的模板较长，普通的Taq 酶很难扩增，一般的酶最多只能扩增5kb以下，热启动酶不过才能扩增10kb，所以你要用专为长片段扩增生产的酶 LA Taq酶扩增，还有，看你的图，模板应该是有问题的，竟然从头拖到尾，也很怪异了，还是重新考虑下模板，而且注意上样量，模板，酶上样量过多也会产生这种效果，引物次要考虑吧，只是出来条带在考虑，
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王小燕30
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
24楼2015-06-18 10:03:51
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是模板被降解了，重新提下模板吧
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25楼2015-06-18 10:10:52
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王小燕30

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
21楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-17 22:33:40
没仔细看，marker还是挺好的，PCR产物跑成这样还真是头一次见呢，这个带这么亮，是不是模板太多了，我们做的PCR，模板终浓度是1 ng/uL到5 ng/uL之间的，你试试，然后可以降低引物浓度，预变性时间延长，第一次见， ...

感谢

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26楼2015-06-18 13:14:07
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王小燕30

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
内容已删除
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27楼2015-06-18 13:16:26
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王小燕30

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xu7462231 at 2015-06-17 11:00:20
我可以告诉你是由于你提取DNA没提好，有一步是加NaOH为了溶解细胞，你这一步要不剧烈振荡了要不就是时间太长，强碱会使DNA断裂成大小不一的片段而导致你拖尾。 你退火温度是68  是不是高了点呢？  一般是TM值减5°  ...

感谢
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28楼2015-06-18 16:49:07
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王小燕30

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by wangs2004 at 2015-06-18 00:34:43
加油吧小建议,别拿枪混得太厉害,或者就不混,用手指弹弹管底就好了...

我会注意的，谢谢啦
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29楼2015-06-18 16:50:38
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主的PCR明显的出现了涂带，我大概知道原因。

我把你的问题发给我美国的师姐（她就是 本版的 顾问 凌波丽），我明天上午大概能够得到她的回复（美国跟这里有数小时的时差），看她是否同意我的见解，明天或者回复你吧。
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30楼2015-06-18 16:58:22
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