【答案】应助回帖

11楼2015-06-17 15:40:21

王小燕30

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10楼: Originally posted by xu7462231 at 2015-06-17 11:00:20
我可以告诉你是由于你提取DNA没提好，有一步是加NaOH为了溶解细胞，你这一步要不剧烈振荡了要不就是时间太长，强碱会使DNA断裂成大小不一的片段而导致你拖尾。你退火温度是68 是不是高了点呢？一般是TM值减5° ...

好吧，就怕是模板DNA的问题，我再提取新的标本去看看。可是我用的是酚氯法提人血标本DNA的。。。

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12楼2015-06-17 15:43:08

zhqingfang

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琼脂糖凝胶浓度太小了，改用2%的浓度试试看

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实验忙碌中

13楼2015-06-17 16:46:42

hx10205

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14楼2015-06-17 18:38:02

wangs2004

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乍一看我以为日光灯呢,LZ的模板是不是坏掉了

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15楼2015-06-17 19:43:26

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11楼: Originally posted by 王小燕30 at 2015-06-17 15:40:21
我的是长距离PCR，反应条件和温度跟这个不一样
...

为什么要我试试这个条件呢？有没有特别的原因哦，我跑的是长片段，看起来似乎不太一样

16楼2015-06-17 22:10:19

王小燕30

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15楼: Originally posted by wangs2004 at 2015-06-17 19:43:26
乍一看我以为日光灯呢,LZ的模板是不是坏掉了

估计是模版不好了

17楼2015-06-17 22:13:11

王小燕30

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13楼: Originally posted by zhqingfang at 2015-06-17 16:46:42
琼脂糖凝胶浓度太小了，改用2%的浓度试试看

这个胶的浓度可以跑出我的marker呢，

18楼2015-06-17 22:14:26

王小燕30

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14楼: Originally posted by hx10205 at 2015-06-17 18:38:02
换引物

为什么

19楼2015-06-17 22:16:34

王平阳

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-06-17 22:50:17

这个图。。。。。。。太壮观了，倚天出鞘啊！
言归正传。你这个应该是胶的问题，即使PCR失败或者模板有问题也不应该是这种情况；建议按如下步骤排查：
1、直接用模板DNA跑电泳或者其他正常扩增的小片段PCR产物（小于2000 bp）跑电泳（可以在同一块胶上加你的长片段PCR产物），如果所有泳道均是上述情况，那么你的胶有问题了。可能原因：胶里面混有大量杂质DNA、胶配制有问题、冷凝时间太短等等。
2、PCR可能的问题，如果操作、试剂和程序没有问题，就是引物特异性太差，导致产物大小不等，不过这个几率非常小。

胶的问题可能性比较大。

没有做不到，只有想不到！

20楼2015-06-17 22:27:18