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397608492

新虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母X33感受态的制备疑问

如题,准备第一次做酵母感受态并进行电转,根据Invitrogen说明书100ml菌液OD600到1.3开始收菌洗涤,最后获取的菌只重悬在200ul山梨醇并以80ul一管分装吗?那岂不是太浓了,而且只能得两三管?求做过的说说看。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-06-14 14:51:25
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:48:48
问题不大的,很多人都是这么做的。一是中间过程的多次洗涤损失了很多细胞,加上离心在转速较低,而且转化的时候菌体浓度和质粒浓度都要求很高的。
3楼2015-06-14 15:00:38
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luwei13566

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你做一次就知道了,不浓的

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
4楼2015-06-14 15:43:14
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5楼2015-06-14 16:17:10
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狮子山下君

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没关系的,可以这样子做!等你做的次数多了,不一定要摇那么多菌!可以一次摇三四十就够了,感受态浓度做高了,涂板子的时候不要全部涂完,不然转化后的板子上面会有很多残留的细胞,长出来的菌会在残留的细胞上面!

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-06-16 13:17:24
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617263900

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-14 15:43:14
你做一次就知道了,不浓的

我做过一次,很浓的,细胞根本不能够混匀
7楼2018-09-18 14:18:56
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