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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 毕赤酵母X33感受态的制备疑问
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397608492

新虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母X33感受态的制备疑问

如题，准备第一次做酵母感受态并进行电转，根据Invitrogen说明书100ml菌液OD600到1.3开始收菌洗涤，最后获取的菌只重悬在200ul山梨醇并以80ul一管分装吗？那岂不是太浓了，而且只能得两三管？求做过的说说看。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-06-14 14:37:44
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617263900

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-14 15:43:14
你做一次就知道了，不浓的

我做过一次，很浓的，细胞根本不能够混匀
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7楼2018-09-18 14:18:56
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-15 22:48:48
问题不大的，很多人都是这么做的。一是中间过程的多次洗涤损失了很多细胞，加上离心在转速较低，而且转化的时候菌体浓度和质粒浓度都要求很高的。
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3楼2015-06-14 15:00:38
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
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你做一次就知道了，不浓的

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大家相互帮助哈
4楼2015-06-14 15:43:14
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狮子山下君

木虫 (正式写手)
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没关系的，可以这样子做！等你做的次数多了，不一定要摇那么多菌！可以一次摇三四十就够了，感受态浓度做高了，涂板子的时候不要全部涂完，不然转化后的板子上面会有很多残留的细胞，长出来的菌会在残留的细胞上面！

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6楼2015-06-16 13:17:24
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