应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液PCR为什么总是没有结果
52/1返回列表
查看: 2964  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

uniquethh

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR为什么总是没有结果 已有6人参与

酶切后的空载质粒板一个菌都没长，实验组长了几十个菌，挑了16个单克隆出来，500ul抗性medium摇菌了1小时后，
菌液PCR体系：1ul的菌液、0.5ul质粒上的前后通用引物， 0.5的Taq酶 ，0.5dNTP , 2ul buffer   加ddw至20ul
菌液PCR条件：95度 5分钟      95度 30秒   58度 30秒  72度2分钟（目的片段是1.8kb）  72度 10分钟   12度  20分钟  
为什么跑胶没有结果，什么都没有P出来？   是不是代表是空载？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-06-01 16:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uniquethh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 丝状真君 at 2015-06-01 23:59:44
既然有菌落了，直接把菌落用牙签沾一点，放在10ul无菌水中混匀，以这个菌悬液做模板，直接PCR啊

没有做过菌落pcr:

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
12楼2015-06-05 19:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一眼看到是摇菌1小时，会不会太短？菌还没有长起来
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-01 16:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lena699

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试直接从单克隆直接蘸取一点菌来做菌落PCR
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-01 18:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接菌落pcr，不必要菌液pcr
赞一下 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
4楼2015-06-01 18:13:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +8 wangmingqi 2026-08-28 9/450 2026-08-28 20:57 by Tide man
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +11 Kittylucky 2026-08-27 12/600 2026-08-28 16:26 by lyxiaomc
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭