| 查看: 1566 | 回复: 2 | |||
[求助]
RNAiso plus法提取构巢曲霉RNA 已有1人参与
|
|
各位大神求帮帮忙吧，提了快一个月的RNA了，用的是RNAiso plus法，提构巢曲霉的RNA,一直没有提出来过，我先说说我的试剂吧： （1）RNAiso PLUS （2）氯仿 （3）异丙醇 （4）75%乙醇（DEPC处理水配制） （5） RNase-free水（用DEPC水替代） （6）5mol/L的Nacl溶液和高盐溶液（0.8mol/L的柠檬酸钠和1.2mol/L的Nacl） 实验所用1.5ml离心管，枪头用都用0.1% DEPC水浸泡后于120℃下高压灭菌20分钟以除去残留的DEPC。实验操作过程中带一次性手套，在超净工作台进行，操作过程全程避免说话。 实验操作： 1、将构巢曲霉接种到铺有玻璃纸的PDA培养基上，28℃培养3d。 2.、用无菌的镊子刮取菌丝，称取0.2g菌丝体于研钵中，用经过液氮预冷的杵子充分研磨，直至菌丝成粉末状，立即进行RNA抽提。 3、将粉末迅速转移至加有1 ml TRIZOL 的2.0 ml离心管中，震荡混匀，室温下静置5分钟。 4、加入0.25 ml氯仿和0.25ml的5mol/L的Nacl溶液，剧烈震荡混匀后，室温下静置5分钟。 5、4℃、12000 r/min离心10min 6、取上清，至另一2.0 ml离心管中，加入等体积的异丙醇和等体积的高盐溶液，（以后操作在冰上进行）颠倒离心管数次混匀，-20℃放置15 min沉淀RNA。 7、4℃、12000 r/min离心10min 8、弃上清，加入75％乙醇1 ml洗涤沉淀（1-2次）。 9、4℃、12000 r/min离心5min 10、弃上清，将离心管置于超净台上自然挥干5 -8min。 11、 加入无RNase的双蒸水20ul，55~60℃放置10min，溶解RNA，一70℃储存备用。 实验结果图（RNA的0.8%的琼脂糖凝胶跑胶25min）: 做了五六次，提出的RNA都是这个结果，很是郁闷，求大神指点  RNA的0.8%的琼脂糖凝胶跑胶25min.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 个人的细菌总RNA提取总结（TRIZOL法）
已经有183人回复
- Trizol 法怎么提取高质量RNA
已经有22人回复
- 碱裂解法提取质粒时怎么减少RNA？
已经有7人回复
- Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
已经有18人回复
- CTAB法提取RNA,电泳后完全无条带
已经有5人回复
- TRIZOL法提取NP69细胞的RNA
已经有3人回复
- invitrogen 的RNA提取中文版 trizol 法
已经有235人回复
- RNA提取TRIZOL法最关键的注意步骤是什么
已经有18人回复
- CTAB法提取RNA
已经有12人回复
- 【求助/交流】Tkara的RNAiso Plus，提取RNA你能否在提取蛋白质呢？
已经有10人回复
2楼2018-04-23 14:49:13
3楼2018-05-25 21:20:33
