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RNAiso plus法提取构巢曲霉RNA 已有1人参与
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各位大神求帮帮忙吧，提了快一个月的RNA了，用的是RNAiso plus法，提构巢曲霉的RNA,一直没有提出来过，我先说说我的试剂吧： （1）RNAiso PLUS （2）氯仿 （3）异丙醇 （4）75%乙醇（DEPC处理水配制） （5） RNase-free水（用DEPC水替代） （6）5mol/L的Nacl溶液和高盐溶液（0.8mol/L的柠檬酸钠和1.2mol/L的Nacl） 实验所用1.5ml离心管，枪头用都用0.1% DEPC水浸泡后于120℃下高压灭菌20分钟以除去残留的DEPC。实验操作过程中带一次性手套，在超净工作台进行，操作过程全程避免说话。 实验操作： 1、将构巢曲霉接种到铺有玻璃纸的PDA培养基上，28℃培养3d。 2.、用无菌的镊子刮取菌丝，称取0.2g菌丝体于研钵中，用经过液氮预冷的杵子充分研磨，直至菌丝成粉末状，立即进行RNA抽提。 3、将粉末迅速转移至加有1 ml TRIZOL 的2.0 ml离心管中，震荡混匀，室温下静置5分钟。 4、加入0.25 ml氯仿和0.25ml的5mol/L的Nacl溶液，剧烈震荡混匀后，室温下静置5分钟。 5、4℃、12000 r/min离心10min 6、取上清，至另一2.0 ml离心管中，加入等体积的异丙醇和等体积的高盐溶液，（以后操作在冰上进行）颠倒离心管数次混匀，-20℃放置15 min沉淀RNA。 7、4℃、12000 r/min离心10min 8、弃上清，加入75％乙醇1 ml洗涤沉淀（1-2次）。 9、4℃、12000 r/min离心5min 10、弃上清，将离心管置于超净台上自然挥干5 -8min。 11、 加入无RNase的双蒸水20ul，55~60℃放置10min，溶解RNA，一70℃储存备用。 实验结果图（RNA的0.8%的琼脂糖凝胶跑胶25min）: 做了五六次，提出的RNA都是这个结果，很是郁闷，求大神指点  RNA的0.8%的琼脂糖凝胶跑胶25min.jpg |
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