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与狼共舞203

木虫 (小有名气)

[求助] 请教关于纳米金连接DNA的问题,希望做过这方面的前辈给一些指导 已有8人参与

最近在做纳米金(15nm) 连接单链DNA (30个碱基左右)的实验,做了几次都连接不成功,之前几次是没有加盐老化,放置56小时候直接离心,然后加PBS(7.0  NaCl 0.25M),之后就聚沉了,最近一次是DNA加到纳米金溶液后,室温放置16h(没有避光),之后每隔一小时加100uL的PBS(7.0 ,NaCl 0.1M)加五次,没有聚沉,再放置35小时候离心,离心完发现离心管底部只有很少的东西,移去上清液后才发现东西都长在离心管(EP管)壁上了( 应该在离心之前就长到壁上了),不知道是什么原因,有做过这方面的前辈帮忙分析一下,能简单写一下你们当初做实验的步骤或者参考的文献就更好了(之前看的文献上步骤不是很详尽),非常感谢!
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marine20082008

至尊木虫 (文坛精英)

碧落堂浮云阁阁主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
与狼共舞203: 金币+5, ★有帮助 2015-06-04 18:34:10
可以先在金纳米上修饰带负电荷(羟基)的有机巯基分子,有利于稳定AU-DNA,可以查国内的博士论文,关键词DNA和AU(南京大学),我以前倒是做过修饰的,光修饰DNA的师兄做过,所以不知道细节!
地球围着太阳转,太阳围着我来转!
70楼2015-06-04 17:37:16
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化学玉豪

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
46楼: Originally posted by 与狼共舞203 at 2015-05-31 08:26:19
请问一下,为什么要用氢氧化钠泡呢,氢氧化钠的浓度是多大的呢?加盐一次5~8uL,请问你的盐的浓度是多大的,我用的是含0.1M的PBS
...

氢氧化钠14M.氯化钠老化500mM的200微升够了

[ 发自小木虫客户端 ]
sciencelover
54楼2015-06-01 13:35:29
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化学玉豪

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
与狼共舞203: 金币+5, ★有帮助 2015-06-02 21:19:56
引用回帖:
47楼: Originally posted by 与狼共舞203 at 2015-05-31 08:30:18
用的是巯基修饰的单链,有一个问题是DNA浓度太大会不会影响后边的杂交啊?我用的是15纳米的金,比例是1比150,浓度已经够大了吧?
...

15nm金颗粒一个,至少500个DNA分子,150个太少了

[ 发自小木虫客户端 ]
sciencelover
55楼2015-06-01 13:36:50
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化学玉豪

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
46楼: Originally posted by 与狼共舞203 at 2015-05-31 08:26:19
请问一下,为什么要用氢氧化钠泡呢,氢氧化钠的浓度是多大的呢?加盐一次5~8uL,请问你的盐的浓度是多大的,我用的是含0.1M的PBS
...

氢氧化钠泡防止DNA黏附在小瓶的内壁上

[ 发自小木虫客户端 ]
sciencelover
56楼2015-06-01 13:38:16
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普通回帖
2楼2015-05-28 09:28:20
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3楼2015-05-28 09:37:49
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4楼2015-05-28 11:13:01
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5楼2015-05-28 12:27:01
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6楼2015-05-28 13:30:03
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7楼2015-05-28 13:30:31
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8楼2015-05-28 13:44:20
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9楼2015-05-28 14:08:26
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10楼2015-05-28 14:37:43
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