| 查看: 933 | 回复: 1 | |||
梅雪芳新虫 (小有名气)
|
[交流]
原代肝细胞MTT实验
|
|
最近在分离小鼠原代肝细胞做MTT，但是遇到一些问题，我的操作过程如下： 1、无菌获取乳鼠肝组织，剪碎至1mm3大小，4℃ DMEM清洗血 2、约2倍于肝组织体积的0.25%胰酶消化3min 3、DMEM-HG终止消化，离心，弃上清 4，加与胰酶同体积的0.1%的二型胶原酶，消化6min 5，DMEM-HG终止消化 6，静置，待组织块下沉，取出上清液，200目细胞筛过滤 7，滤液离心，弃上清 8，于沉淀中加入红细胞裂解液，裂解3min 9，DMEM-HG终止裂解，离心，弃上清 10，加DMEM-HG重悬，台盼蓝计数，细胞数约达到7次方个 11,96孔板铺板，每孔200uL，5*104个/孔 12，孵育12h后细胞贴壁良好，加5mg/ml MTT 20ul/孔 作用4h 13，弃上清，加150ul/孔 DMSO，振荡10min 14，使用490nm读数。 问题是，加入MTT作用4h以后，没有形成蓝紫色甲瓒结晶，显微镜下看，只有及少数细胞内形成了结晶，读数也只是0.1~0.3之间。 我考虑到的几点原因是： 1，细胞浓度太小。因为我咨询过做脾细胞相关实验的，说是把细胞浓度调到了6次方/孔 2，细胞活力不好。可是从贴壁性能来看，细胞活力应该也不会太差 3，细胞太杂，分离出来的时候明显有枯否细胞、成纤维细胞等 不知道有没有人做过相关实验，可以交流或指导  |
回复此楼» 猜你喜欢
R语言问题，森林图中，这个横坐标怎么实现？
已经有0人回复
-
中西医结合论文润色/翻译怎么收费?
已经有119人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- hela细胞中小黑点
已经有18人回复
- 有木有谁建立细胞株的呀，求经验
已经有16人回复
- 做原代时细胞数量取少了会不会影响细胞正常增殖
已经有4人回复
- 第一次做细胞培养，这是我刚接种与96孔板细胞的状况，是否正常？
已经有9人回复
- 体细胞作为广义的APC细胞，能够刺激T细胞增殖吗？
已经有15人回复
- 请教关于MDA-MB-453细胞的培养问题
已经有6人回复
- 求教昆虫细胞培养问题
已经有7人回复
- 关于肝细胞和药物相互作用的实验
已经有7人回复
- 比淋巴细胞还小的细胞
已经有22人回复
- 求教Cell biology international 的投稿状态
已经有12人回复
- 请教结核杆菌感染的T细胞与239T细胞一样吗？
已经有5人回复
- 细胞培养相关问题 急！！！！！
已经有13人回复
- 【求助】多孔材料中细胞全液的提取方法
已经有11人回复
- 【求助】求教肝细胞原代培养!
已经有15人回复
- 【求助/交流】原代细胞的分离与纯化培养
已经有17人回复
- 【求助/交流】求教拟南芥的培养方法。
已经有9人回复
2楼2015-10-29 11:49:07