应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 前处理 » 大家好，我想请教一下反相HPLC分析蛋白样品时，前处理应该怎能做
121/2返回列表12下一页
查看: 1790  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xuelvsnow

新虫 (小有名气)

[求助] 大家好，我想请教一下反相HPLC分析蛋白样品时，前处理应该怎能做 已有5人参与

我之前用过C18，C8 流动相是 A：水 0.1%三氟乙酸 B：乙腈或甲醇 0.085%三氟乙酸
上样是20ul，
今天发现 我的样品在B液中析出大量沉淀  这样会不会对我的柱子有影响啊，因为我发现上样次数多了，检测出的峰偏低 偏少了，甚至没有什么峰了。
我的样品前处理是：将1g样品 溶于10ml PH7.0的50mMPBS中 超速离心取上清。  
我想知道，如果我的样品在有机相中沉淀，是不是前处理的问题，如有是的话应该怎么办呢；还是需要调节有机相啊？
图片中分别是 水；乙腈；甲醇；乙醇；异丙醇；(纯的)  100-200ul样品 +1mL溶剂 离心后的效果
非常感谢大家的帮助!

大家好，我想请教一下反相HPLC分析蛋白样品时，前处理应该怎能做
IMG_0589.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-14 22:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuelvsnow: 金币+5, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢你的文献，给了我些思路。 2015-05-16 14:45:41
TFA、甲醇、乙腈随便一个都能使蛋白沉淀。我建议你查查文献。这里给你找了一篇供参考。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 0fcfd510bf7aceb0f1000000.pdf
    • 2015-05-15 11:41:49, 62.59 K
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
4楼2015-05-15 11:41:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青雅

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuelvsnow: 金币+3, ★有帮助, O(∩_∩)O谢谢，我的目标物是蛋白，不能除去。 2015-05-16 14:46:37
一般来说，甲醇和乙腈有沉淀蛋白的作用，蛋白析出当然会对柱子不好，会堵，而且不好修复。建议改进样品处理方法，可以直接用甲醇沉淀除尽蛋白再离心进样

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-05-14 23:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuziling

金虫 (正式写手)
我们以前测的药物，所以要先沉淀蛋白，但你测的蛋白，如果用甲醇、乙腈沉淀了还怎么测？
赞一下(1人) 回复此楼
开心每一天
5楼2015-05-15 11:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

organicsuper

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuelvsnow: 金币+4, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢，我是第一次做蛋白的高效液相，浓度因素真的是很重要。 2015-05-16 14:42:33
6mg/mL....................浓度太高了吧,我这边做1mg/mL,都还要稀释才行!
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-05-16 08:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xuelvsnow

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 青雅 at 2015-05-14 23:02:47
一般来说，甲醇和乙腈有沉淀蛋白的作用，蛋白析出当然会对柱子不好，会堵，而且不好修复。建议改进样品处理方法，可以直接用甲醇沉淀除尽蛋白再离心进样

那还有蛋白样品吗  我是测蛋白的
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-15 08:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mao877516786

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 化学化工区禁止留下联系方式。 2015-05-15 13:12:09
xuelvsnow: 金币+4, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢 我的柱压没有怎么变好像 2015-05-16 14:44:38
纯的有机相出现沉淀应该算是正常现象吧，而且在洗脱浓度是也不是纯有机相相呀，你又不是用纯有机相洗脱，至于为什么你的峰会越来越矮，不好说，有没有可能存在降解。。。。。还有你的柱压升高了么，样品在色谱柱析出，柱压应该会有反应才是。。。
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-15 12:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuelvsnow

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mao877516786 at 2015-05-15 12:40:42
纯的有机相出现沉淀应该算是正常现象吧，而且在洗脱浓度是也不是纯有机相相呀，你又不是用纯有机相洗脱，至于为什么你的峰会越来越矮，不好说，有没有可能存在降解。。。。。还有你的柱压升高了么，样品在色谱柱析出 ...

刚才查了查之前做的图，发现柱压没有怎么升高，我今天又做了几个实验 30-100%的乙腈都能使我的样品有沉淀，而且不可再用水溶解，甲醇的也有沉淀，用水能溶解。
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-15 19:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuelvsnow

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xuziling at 2015-05-15 11:55:41
我们以前测的药物，所以要先沉淀蛋白，但你测的蛋白，如果用甲醇、乙腈沉淀了还怎么测？

我也觉得我的样品蛋白量（~6mg/ml），测出来的峰高有点低。
赞一下 回复此楼
8楼2015-05-15 19:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songbingna

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuelvsnow: 金币+3, ★有帮助, 谢谢O(∩_∩)O~还是先找找这个方法的问题，然后再换。 2015-05-16 14:40:30
蛋白在有机相中是会沉淀，不行，你就换方法咯。。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
comeonbaby
10楼2015-05-16 08:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuelvsnow 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +5 yufeiwaner 2026-08-09 5/250 2026-08-10 08:15 by BlakeReary
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭