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蛋白质纯化与鉴定实验指南
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目录 一、能用作纯化依据的蛋白质性质 1 二、分子相互作用的类型及其影响因素 5 三、分离方法的类型 6 参考文献 7 如何使用本指南 9 第1单元 钙调蛋白的纯化 Daniel R. Marshak 11 实验1 活性测定：钙调蛋白组分的活性测定 19 实验2 组织提取物的制备 24 实验3 粗分级分离 32 实验4 离子交换层析 39 实验5 疏水作用层析 46 实验6 钙调蛋白的鉴定：收率的计算 51 实验7 钙调蛋白的鉴定：电泳 53 、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 53 二、无法垢剂的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 54 三、尿素梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳与折叠分析 56 实验8 蛋白质的裂解消化 59 一、钙调蛋白的溴化氰裂解 63 二、钙调蛋白的胰蛋白酶消化 64 实验9 反相高效液相色谱 66 实验10 钙调蛋白的物理分析 70 一、紫外吸收光谱 70 二、蛋白质和肽的质谱 71 实验11 钙调蛋白的化学分析 75 一、氨基酸分析 75 二、序列分析 76 试剂的配制 82 第2单元 Hela细胞转录因子AP-1的纯化 James T. Kadonaga 89 实验1 Hela细胞核提取物的制备 91 实验2 Sephacry S-300 HR凝胶过滤层析 94 一、如何装填凝胶过滤性 96 二、Hela细胞核提取物的Sephacry S-300 HR柱层析 98 实验3 序列特异性DNA亲和层析 101 一、用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸 105 二、DNA亲和介质的制备 107 三、亲和层析中非特异性竞争DNA的正确使用 112 四、亲和层析的操作 113 实验4 DNA酶I足迹分析 117 一、DNA酶I足迹探针的制备 118 二、DNA酶I足迹分析 122 实验5 凝胶迁移变动分析 126 实验6 肝素-Sepharose CL-2B的制备 |
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