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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白鉴定中的疑惑
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白鉴定中的疑惑

我先做双向，然后挖点进行鉴定，鉴定中出现了几个不懂的问题，求大家帮着解答，1,二级质谱鉴定，序列覆盖率很低，2，蛋白的理论等电点和分子量与实验跑胶给出的等电点和分子量差距较大，，如有的分子量能差一半，等电点能差3，
我想问一下，如果是这样的结果，那么，蛋白鉴定结果还可靠吗
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1楼 2013-01-07 15:58:40
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回帖置顶 ( 共有1个 )

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: MolEPI+1, 很好的 2013-01-07 19:32:46
追梦的人1987: 金币+5, ★有帮助 2013-01-08 13:59:51
蛋白的理论等电点和分子量仅仅是理论，具有参考价值，实际以实验为准。我想问一下你使用SDS-PSGE测定的还是分子筛还是质谱仪测定的分子量？这三个最准确的是质谱仪。至于等电点理论我认为偏差更大，应是注明在何种温度和离子强度下的等电点，否则某有意义。一切以准确测定为依据，理论仅是参考。
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2楼2013-01-07 18:19:05
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白在PAGE中的分子量是表观分子量，与理论值有些差距很正常。尤其是疏水性强的蛋白，差距更加明显。pI相差很多的是不是有修饰，比方说磷酸化什么的？
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3楼2013-01-08 09:08:58
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 09:08:58
蛋白在PAGE中的分子量是表观分子量，与理论值有些差距很正常。尤其是疏水性强的蛋白，差距更加明显。pI相差很多的是不是有修饰，比方说磷酸化什么的？

1
4楼2013-01-08 13:59:58
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-07 18:19:05
蛋白的理论等电点和分子量仅仅是理论，具有参考价值，实际以实验为准。我想问一下你使用SDS-PSGE测定的还是分子筛还是质谱仪测定的分子量？这三个最准确的是质谱仪。至于等电点理论我认为偏差更大，应是注明在何种温 ...

恩，实验的是sds跑胶
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5楼2013-01-08 14:13:39
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hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-01-08 14:13:39
恩，实验的是sds跑胶...

那就是变性胶测定，只能测定单亚基分子量，况且是大概数值，最好是MS测定
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6楼2013-01-08 20:25:27
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