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陈鲁超

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转染效率及过程求解 已有1人参与

想了解一下大家做细胞转染时的几个小细节:1、对于胃癌细胞MC-4,SGC-7901,大家都是分了细胞之后多长时间做转染呢?或者细胞长到那种密度做转染呢?2、转染之后大家都是多久收细胞呢?或者是多大密度收细胞呢?3、转染之后的细胞如果很长时间不收,例如48h~72h不收细胞,转进去的外源基因还有没有表达呢?表达量怎么样呢?我用的是invitrogen公司的,lipofectamine2000reagent,沉默stat3基因,做完转染后阴性对照荧光极弱,无论怎么优化都没有很亮的荧光,将希望和有经验的大侠探讨一下啊
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zmxwfd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般提前一天铺板,使细胞第二天大概涨到70%满时做转染。
你担心降解的话可以同时做四个板。分别24H,48,72H96H收,做WB对比。
我的经验看时间越长蛋白的量会越过。细胞没死的话不会降解
2楼2015-05-15 20:54:53
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