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陈鲁超

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 446.9
散金: 5
帖子: 25
在线: 15.1小时
虫号: 3701502
注册: 2015-02-28
性别: GG
专业: 细胞信号转导

[求助] 转染效率及过程求解已有1人参与

想了解一下大家做细胞转染时的几个小细节：1、对于胃癌细胞MC-4，SGC-7901，大家都是分了细胞之后多长时间做转染呢？或者细胞长到那种密度做转染呢？2、转染之后大家都是多久收细胞呢？或者是多大密度收细胞呢？3、转染之后的细胞如果很长时间不收，例如48h~72h不收细胞，转进去的外源基因还有没有表达呢？表达量怎么样呢？我用的是invitrogen公司的，lipofectamine2000reagent，沉默stat3基因，做完转染后阴性对照荧光极弱，无论怎么优化都没有很亮的荧光，将希望和有经验的大侠探讨一下啊

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1楼 2015-05-09 10:57:05

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zmxwfd

新虫 (初入文坛)

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注册: 2011-09-07
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

一般提前一天铺板，使细胞第二天大概涨到70%满时做转染。
你担心降解的话可以同时做四个板。分别24H,48，72H96H收，做WB对比。
我的经验看时间越长蛋白的量会越过。细胞没死的话不会降解

赞一下(1人)

2楼2015-05-15 20:54:53

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