应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞单克隆筛选---愁死我了
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 3989  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞单克隆筛选---愁死我了 已有2人参与

小弟现在正在筛细胞单克隆，用的是吉玛公司合成的pGPU6/GFP/Neo干扰载体，筛了7天之后克隆已经长出来了，而且荧光比较亮，克隆状态也挺好。但是过了几天，克隆的绿色荧光就逐渐减弱，今天看的时候基本上没有荧光了，这是为什么！？我都奔溃了。
还有我同时筛的DOX诱导过表达载体，双载体的单克隆实在是难筛。我都筛了两个月了，还没有出阳性克隆，请问各位有什么好的方法能够提高双载体筛选效率。
以上两个问题，如果能给出一些建议，感激不尽~！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-05 23:15:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:04:47
瞬转siRNA 长一段时间，就会丢失，你被他们忽悠了吧
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-06 09:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:04:54
单克隆筛选现在有个产品挺好的，cell plaza 利用共培养的方式去筛选单克隆
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-06 09:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小刀188 at 2015-05-06 09:05:42
瞬转siRNA 长一段时间，就会丢失，你被他们忽悠了吧

这个是干扰载体，不是小RNA，说明说上写的可以进行克隆的筛选
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-06 13:05:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你是只要在这个细胞里表达一个荧光标签是吧，而且是稳定转染的细胞株？
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-06 13:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小刀188 at 2015-05-06 13:08:06
你是只要在这个细胞里表达一个荧光标签是吧，而且是稳定转染的细胞株？

不是，这是个干扰载体，含有干扰小片段和GFP，分别用不同的启动子
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-06 15:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2015-05-06 15:56:09
不是，这是个干扰载体，含有干扰小片段和GFP，分别用不同的启动子...

还是做一下Cas9吧，直接敲除了，省着麻烦
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-06 17:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
KEVIN_LOVE: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-05-09 21:20:14
荧光过一段时间就会消失，老板曾经讲过是因为设计的时候选用了双顺反子什么的，不过没有关系，只要两端存在UTR序列，就能够稳定整合进基因组。
赞一下(1人) 回复此楼
此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
8楼2015-05-08 18:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-05-08 18:20:23
荧光过一段时间就会消失，老板曾经讲过是因为设计的时候选用了双顺反子什么的，不过没有关系，只要两端存在UTR序列，就能够稳定整合进基因组。

你们也是用的这种载体吗？
赞一下 回复此楼
9楼2015-05-12 10:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
楼主问题解决了吗？是否成功筛选稳定细胞株了，双载体筛了两个月也没有一个单克隆是要奔溃啦，楼主是用什么方法筛的额，用的是什么抗性，最后筛出来了么，有没有什么好的建议。。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-11-09 11:15:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 KEVIN_LOVE 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校 +3 披星河 2026-04-04 3/150 2026-04-04 12:36 by 学员tURuqU
[考研] 0703总分331求调剂 +4 ZY-05 2026-04-04 4/200 2026-04-04 12:11 by supralkaloid
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +6 lyz0427 2026-04-03 6/300 2026-04-04 08:09 by 岸上的一条鱼
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 8/400 2026-04-04 07:52 by 1753564080
[考研] 283求调剂 +5 A child 2026-03-28 5/250 2026-04-04 00:40 by userper
[考研] 311求调剂 +20 zchqwer 2026-04-01 22/1100 2026-04-03 22:09 by lglzsd
[考研] 315求调剂 +12 小羊小羊_ 2026-04-02 12/600 2026-04-03 18:22 by ls刘帅
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +13 哇呼哼呼哼 2026-03-30 15/750 2026-04-03 15:24 by arrow8852
[考研] 333求调剂 +9 wfh030413@ 2026-04-03 9/450 2026-04-03 14:20 by 啊俊！
[考研] 294求调剂 +3 Grey_Ey 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:34 by swb0218
[考研] 349求调剂 +10 zwjjjjjj 2026-03-31 10/500 2026-04-02 20:13 by dongzh2009
[考研] 327求调剂 +9 汲亦昊 2026-03-29 9/450 2026-04-02 11:44 by 运气yunqi
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 材料工程专硕求调剂 +10 hyl3153942 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:31 by hypershenger
[考研] 343求调剂 +8 爱羁绊 2026-03-28 8/400 2026-03-31 16:12 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭