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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞单克隆筛选---愁死我了 已有2人参与

小弟现在正在筛细胞单克隆,用的是吉玛公司合成的pGPU6/GFP/Neo干扰载体,筛了7天之后克隆已经长出来了,而且荧光比较亮,克隆状态也挺好。但是过了几天,克隆的绿色荧光就逐渐减弱,今天看的时候基本上没有荧光了,这是为什么!?我都奔溃了。
还有我同时筛的DOX诱导过表达载体,双载体的单克隆实在是难筛。我都筛了两个月了,还没有出阳性克隆,请问各位有什么好的方法能够提高双载体筛选效率。
以上两个问题,如果能给出一些建议,感激不尽~!
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-05-08 18:20:23
荧光过一段时间就会消失,老板曾经讲过是因为设计的时候选用了双顺反子什么的,不过没有关系,只要两端存在UTR序列,就能够稳定整合进基因组。

你们也是用的这种载体吗?
9楼2015-05-12 10:37:08
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:04:47
瞬转siRNA 长一段时间,就会丢失,你被他们忽悠了吧
2楼2015-05-06 09:05:42
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:04:54
单克隆筛选现在有个产品挺好的,cell plaza 利用共培养的方式去筛选单克隆
3楼2015-05-06 09:09:51
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小刀188 at 2015-05-06 09:05:42
瞬转siRNA 长一段时间,就会丢失,你被他们忽悠了吧

这个是干扰载体,不是小RNA,说明说上写的可以进行克隆的筛选
4楼2015-05-06 13:05:50
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