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mofashishe

铜虫 (小有名气)

[求助] 植物的蛋白在不同组织的功能问题?

请问在叶绿体的蛋白有可能出现在植物根组织中的吗,在叶片中该蛋白是定位在叶绿体里面的,在根组织中定位在细胞质正常吗?

该蛋白是一个与光合作用过程中电子传递有关的蛋白,我通过WB证实了那个蛋白的确在根组织里面也存在,但是在投稿过程中reviewer一直对这个实验结果表示高度的怀疑,要我们进行详细讨论,请问大家有遇到过这种情况吗?


还有一个问题是,两组小样本(5<n<30)的显著性分析使用什么方法比较好?我原来使用student t-test的但是评委认为这种方法不适合小样本之间的比较。
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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WB验证,你的抗体特异性足够么?有可能是表达在根中和你研究蛋白类似的东西。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2015-04-12 20:58:52
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mofashishe

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-12 20:58:52
WB验证,你的抗体特异性足够么?有可能是表达在根中和你研究蛋白类似的东西。

WB单带,而且分子量也对,那样还有什么方法证明特异性呢?
3楼2015-04-13 10:26:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

我的意思是否可能在根中有很近似的同原蛋白。可以用你已知蛋白保守区域的序列,去根中找找表达它或类似蛋白的基因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2015-04-13 13:51:18
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mofashishe

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-13 13:51:18
我的意思是否可能在根中有很近似的同原蛋白。可以用你已知蛋白保守区域的序列,去根中找找表达它或类似蛋白的基因。

那个抗体所用的多肽片段是参考已经发表的论文的,而且我在公司合成那个抗体的时候让他们分析那段多肽的特异性,他们也说在拟南芥里面没有同源的片段的。
5楼2015-04-14 10:56:52
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天际雾影

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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mofashishe: 金币+10, 有帮助 2015-04-15 18:28:20
你这个蛋白有可能参与了叶绿体的发育过程,从质体到叶绿体过程都需要的话,在根中可能会检测到。你比较一下在根中和叶片中蛋白积累量和基因表达量,应该是有差异的。
6楼2015-04-14 21:01:44
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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mofashishe: 金币+10, 有帮助 2015-04-15 18:27:57
mofashishe: 金币+5, 有帮助 2015-04-23 11:01:27
(1)WB 做个阴性对照,拿你的那个蛋白的knockout的mutant来做,如果在mutant根里还能检测到的话,那就有可能是非特异性的原因了。
(2)你做定位的时候用的启动子是什么,如果是35S或是ubiquitin的,那不奇怪在根中的定位变为了细胞质。
7楼2015-04-15 04:22:53
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

引用回帖:
7楼: Originally posted by sun_in_night at 2015-04-15 04:22:53
(1)WB 做个阴性对照,拿你的那个蛋白的knockout的mutant来做,如果在mutant根里还能检测到的话,那就有可能是非特异性的原因了。
(2)你做定位的时候用的启动子是什么,如果是35S或是ubiquitin的,那不奇怪在根中 ...

为什么使用这些启动子在根中就应该定位在细胞质?难道是因为根中不存在叶绿体?

发自小木虫Android客户端
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
8楼2016-02-01 02:41:49
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