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金陵棠邑

新虫 (小有名气)

[求助] 请问从植物愈伤组织中提取蛋白质的可行方法有哪些? 已有1人参与

我目前做的是黑荆树愈伤组织中关键酶的提取,请问从植物愈伤组织中提取蛋白质的方法一般有哪些?我看到过有用TCA-丙酮法提蛋白质的,这个方法到底怎么样?
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starseacow

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
金陵棠邑: 金币+3 2015-03-09 19:59:46
q317476148: 金币+2, 感谢 2015-03-09 22:38:36
不知道你的实验目的是什么?测定酶活性?另外,提取缓冲液的选择也和具体哪种酶有关,需要考虑保护酶活性和不引入干扰检测的物质。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2015-03-09 17:00:37
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金陵棠邑

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-03-09 17:00:37
不知道你的实验目的是什么?测定酶活性?另外,提取缓冲液的选择也和具体哪种酶有关,需要考虑保护酶活性和不引入干扰检测的物质。

找出影响次生代谢产物积累的关键酶,目前还不清楚究竟含有哪些酶呢。只知道它是属于黄酮类的,所以应该与生成黄酮类次生代谢物的酶类似吧,应该怎么做呢?
3楼2015-03-09 19:59:35
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starseacow

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 金陵棠邑 at 2015-03-09 19:59:35
找出影响次生代谢产物积累的关键酶,目前还不清楚究竟含有哪些酶呢。只知道它是属于黄酮类的,所以应该与生成黄酮类次生代谢物的酶类似吧,应该怎么做呢?...

这不是应该从分子水平入手的课题么?单纯提粗酶液打算做什么?难道你还要纯化测活性?
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2015-03-09 20:01:18
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金陵棠邑

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2015-03-09 20:01:18
这不是应该从分子水平入手的课题么?单纯提粗酶液打算做什么?难道你还要纯化测活性?...

应当是要纯化,具体看看哪些酶促进黑荆树愈伤组织中原花色素的生成
5楼2015-03-09 20:26:24
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starseacow

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 金陵棠邑 at 2015-03-09 20:26:24
应当是要纯化,具体看看哪些酶促进黑荆树愈伤组织中原花色素的生成...

从粗酶纯化没什么方向性,我觉得不是个好研究思路。还是参考已知报道,从DNA水平,扩增出具有潜在活性的基因,在大肠杆菌或其他合适工程宿主中表达纯化检测活性比较好。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
6楼2015-03-09 21:46:48
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