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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 利福平培养基摇农杆菌菌液的颜色 已有3人参与

大家好!我刚接触农杆菌,最近想自己做些农杆菌感受态(GV3101),但最近我用含利福平的LB和YEP摇农杆菌,菌液颜色差异很大,甚是困惑。
1 我的利福平是50mg/ml(DMSO溶解,过滤膜,EP管分装-20度保存),1L培养基加1ml,我发现刚加进去的时候整瓶培养基是金黄色,过几个小时后就变成酒红色了,这是什么原因呢?正常吗?
2 我挑农杆菌单菌落到5ml 含利福平LB过夜摇,然后取2ml到50ml利福平LB摇4h,出现2种颜色(如下图)
  图中1加入的利福平是1个EP管已用过2,3次的,即反复冻融过的,培养基加入利福平第二天颜色才变红色;测OD值为1左右,底部有白白的沉淀
  图中2加入的利福平是新的一管,40度水浴解冻,培养基刚加入是黄色,2,3个小时后变红色(图中3)
      
关于正常的颜色应该是如何我真不知道了,麻烦哪位高手帮我解答下,感激不尽了

利福平培养基摇农杆菌菌液的颜色
IMG20150404164514.jpg
利福平培养基摇农杆菌菌液的颜色-1
IMG20150404164315.jpg
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shiliyusly: 金币+3 2015-04-07 16:43:02
通常我们使用的rif即使配制50mg/ml,实际使用时浓度也不够,会有少许沉淀,我一般都是在冰盒上解冻,用前摇匀,比例1:1000的加,有时会增加筛选压多加一些,一般加入是酒红色,摇至橙色、有混浊感时就可以使用了。
4楼2015-04-06 11:11:36
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yantaowang

金虫 (正式写手)

奋斗小青年

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shiliyusly: 金币+3 2015-04-05 09:14:34
我师兄每次摇农杆菌都是从酒红色变成果粒橙的颜色就差不多了。。。。
我生命里的温暖就那么多......全部给了你!
2楼2015-04-04 18:26:51
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yantaowang at 2015-04-04 18:26:51
我师兄每次摇农杆菌都是从酒红色变成果粒橙的颜色就差不多了。。。。

谢谢你
3楼2015-04-05 09:14:26
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

图1底部有白白的沉淀会不会是死亡的菌体,我也遇到过,也很困惑,求解。
5楼2015-04-07 11:39:11
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