24小时热门版块排行榜    

查看: 1611  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

魏墨玄

新虫 (初入文坛)

[求助] 急!做线粒体的三段基因,跑出来的电泳为什么是这个样子的!Marker怎么都看不清? 已有2人参与

DNA提取用的是Qiagen的试剂盒
pcr体系是25ul的
12ul Taq 酶
1ul 模板
2ul 引物各1ul
10ul ddH2O

PCR反应条件
(1)扩增D-loop基因的反应条件
94 ℃预变性3min;94℃变性45s,退火温度退火30 s,72 ℃延伸90 s,循环35 次;最后72℃延伸5 min。
(2)扩增cyt b基因的反应条件
94 ℃预变性80 s;94℃变性42 s,47℃退火30 s,72 ℃延伸80 s,循环30 次;最后72℃延伸5 min。
(3)扩增Cox1基因的反应条件

94 ℃预变性80 s;94℃变性42 s,55℃退火30 s,72 ℃延伸80 s,循环30 次;最后72℃延伸5 min。

电泳用的1.5%琼胶,120V电压 35min,TBE缓冲液

急!做线粒体的三段基因,跑出来的电泳为什么是这个样子的!Marker怎么都看不清?
20150325wwzD.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

降低模板的浓度并保证模板的纯度,或者使用性能更好的Taq聚合酶(热启动Taq聚合酶)
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-03-26 13:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有说明目标片段的大小
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-26 13:15:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菁JOJO

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一、Marker 跑的效果都不好,如果确定marker没问题的话,说明胶的效果都不好,或者TBE 是不是换新的试一试;二、目的片段大小是多少,是不是在正确位置;
三、请教一下你,你用的是QIAGEN 直接从组织(细胞)提取mtDNA 的试剂盒么?
4楼2015-06-24 17:24:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哒哒汤圆

新虫 (初入文坛)

样品比marker的颜色还要亮了……marker不亮1.可能是marker的问题,是不是保存温度不对,然后质量下降,或者过期之类的,借别人的marker对比一下。2.胶的问题3.缓冲液……(个人觉得marker问题的比例大一点)

发自小木虫Android客户端
5楼2018-12-07 20:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:10 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:32 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:24 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:21 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见