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魏墨玄

新虫 (初入文坛)

[求助] 急!做线粒体的三段基因,跑出来的电泳为什么是这个样子的!Marker怎么都看不清? 已有2人参与

DNA提取用的是Qiagen的试剂盒
pcr体系是25ul的
12ul Taq 酶
1ul 模板
2ul 引物各1ul
10ul ddH2O

PCR反应条件
(1)扩增D-loop基因的反应条件
94 ℃预变性3min;94℃变性45s,退火温度退火30 s,72 ℃延伸90 s,循环35 次;最后72℃延伸5 min。
(2)扩增cyt b基因的反应条件
94 ℃预变性80 s;94℃变性42 s,47℃退火30 s,72 ℃延伸80 s,循环30 次;最后72℃延伸5 min。
(3)扩增Cox1基因的反应条件

94 ℃预变性80 s;94℃变性42 s,55℃退火30 s,72 ℃延伸80 s,循环30 次;最后72℃延伸5 min。

电泳用的1.5%琼胶,120V电压 35min,TBE缓冲液

急!做线粒体的三段基因,跑出来的电泳为什么是这个样子的!Marker怎么都看不清?
20150325wwzD.JPG
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有说明目标片段的大小
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-26 13:15:31
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

降低模板的浓度并保证模板的纯度,或者使用性能更好的Taq聚合酶(热启动Taq聚合酶
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-03-26 13:18:51
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菁JOJO

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一、Marker 跑的效果都不好,如果确定marker没问题的话,说明胶的效果都不好,或者TBE 是不是换新的试一试;二、目的片段大小是多少,是不是在正确位置;
三、请教一下你,你用的是QIAGEN 直接从组织(细胞)提取mtDNA 的试剂盒么?
4楼2015-06-24 17:24:08
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哒哒汤圆

新虫 (初入文坛)

样品比marker的颜色还要亮了……marker不亮1.可能是marker的问题,是不是保存温度不对,然后质量下降,或者过期之类的,借别人的marker对比一下。2.胶的问题3.缓冲液……(个人觉得marker问题的比例大一点)

发自小木虫Android客户端
5楼2018-12-07 20:17:26
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