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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 大神帮我看看我这WB是怎么了？
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dan-deng

银虫 (初入文坛)

[求助] 大神帮我看看我这WB是怎么了？ 已有3人参与

做出来没条带，很丑但ACTIN正常，求帮忙分析。
一抗是博尔森的  稀释3000倍  二抗稀释10000倍  以前做起来都没问题的 这次为什么突然变成这种了？
第二张图是Actin

大神帮我看看我这WB是怎么了？
2015.03.25_11.13.13_Ch+Marker.jpg


大神帮我看看我这WB是怎么了？-1
2015.03.25_16.30.34_Ch+Marker.jpg
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1楼 2015-03-25 17:30:49
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
遇过类似的情况，当时我们换了一种国产的保鲜膜。后来分析里面可能有重金属离子，导致发光液底物淬灭，会发出这样的光。不知能不能帮上你，如果你其他部分都没有问题的话。
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2楼2015-03-25 19:39:07
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dan-deng

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-03-25 19:39:07
遇过类似的情况，当时我们换了一种国产的保鲜膜。后来分析里面可能有重金属离子，导致发光液底物淬灭，会发出这样的光。不知能不能帮上你，如果你其他部分都没有问题的话。

应该不是    我上次也是用的这种保鲜膜也做出来过   不知道是不是胶的问题   你觉得又没可能？
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3楼2015-03-25 20:16:03
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kokimushi

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为对照很好 所有如果不是抗体的问题，可能有以下几点原因：
1 加样品加太多；
2 加样的时候孔没有疏通以下 导致加冒
3 没有洗好
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To do wot really like.
4楼2015-03-25 22:29:40
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by dan-deng at 2015-03-25 20:16:03
应该不是    我上次也是用的这种保鲜膜也做出来过   不知道是不是胶的问题   你觉得又没可能？...

可是你对照没这么严重的问题呀，我的一个怀疑是，有没有可能你出问题的那张保鲜膜上洒过什么东西……配胶我一般把APS减半，让胶凝得慢一些，会比较均一，可能会避开一些不知道的问题。
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5楼2015-03-26 13:16:05
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是压得时间太长了，还有可能是膜没有洗干净，或者是加荧光试剂后盖保鲜膜时蹭到了，显影要很小心~~~
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6楼2015-03-26 15:30:07
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