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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » PVDF膜被过度封闭后如何处理
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wyanyun

铁虫 (初入文坛)

[求助] PVDF膜被过度封闭后如何处理 已有4人参与

各位，本人目前在做一实验，在PVDF膜上包被多个抗体，用以检测样本中的抗原，但是显色后发现，样本浓度低的样本有清楚显色，而样本浓度高的样本反而没有显色，有老师认为是因为高蛋白浓度的样本将膜封闭了，导致抗原无法和膜上抗体结合。由于包被好的膜非常珍贵，所以想请教各位是否有办法处理，让我可以重新调整样本浓度后再次检测，谢谢！
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1楼 2014-09-30 15:17:13
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果真是蛋白浓度过高的话，那就试着多洗几遍膜看看，
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人生中的悲剧太多了
2楼2014-10-03 15:21:44
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巨可爱的小猪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

样本怎么能把膜封闭了呢，就算膜上样本过多，样本也会于抗体特异性结合，使膜曝光更强啊。
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3楼2014-10-03 21:13:19
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不会的，下次再做时，把不同的蛋白剪开分别抗就好

[ 发自小木虫客户端 ]
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江山
4楼2014-10-04 13:30:13
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样品浓度高的不显色，这应该不是封闭的问题。我倒觉得是检测方法本身的局限，很多方法都只能测低浓度而不能测高浓度，你不妨说说你的方法的检测原理。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-10-04 18:53:09
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wyanyun

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuderong at 2014-10-04 18:53:09
样品浓度高的不显色，这应该不是封闭的问题。我倒觉得是检测方法本身的局限，很多方法都只能测低浓度而不能测高浓度，你不妨说说你的方法的检测原理。

就是在膜上标记多个抗体，然后用生物素标记样本中的蛋白，之后将标记好的样本与膜反应。我也觉得不是封闭的问题，我的对照组样本都出来了，疾病组比对照组样本浓度高了10倍而已。
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6楼2014-10-08 15:04:32
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wyanyun

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 巨可爱的小猪 at 2014-10-03 21:13:19
样本怎么能把膜封闭了呢，就算膜上样本过多，样本也会于抗体特异性结合，使膜曝光更强啊。

我也这么觉得，但是确实找不到其他解释了
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7楼2014-10-08 15:05:49
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Budaogao

新虫 (小有名气)
封闭久了背景会深，但是浓度高的话反而更好曝光，浓度低应该背景更深才对啊，换一种显色剂试试呢，用用别人的

发自小木虫IOS客户端
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8楼2019-01-19 20:28:01
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Budaogao

新虫 (小有名气)
但是不应该让蛋白被封闭啊，如果会这样的话，如何在特异性结合一抗呢，应该不是这个原因吧

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9楼2019-01-19 20:28:59
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