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wyanyun

铁虫 (初入文坛)

[求助] PVDF膜被过度封闭后如何处理 已有4人参与

各位,本人目前在做一实验,在PVDF膜上包被多个抗体,用以检测样本中的抗原,但是显色后发现,样本浓度低的样本有清楚显色,而样本浓度高的样本反而没有显色,有老师认为是因为高蛋白浓度的样本将膜封闭了,导致抗原无法和膜上抗体结合。由于包被好的膜非常珍贵,所以想请教各位是否有办法处理,让我可以重新调整样本浓度后再次检测,谢谢!
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果真是蛋白浓度过高的话,那就试着多洗几遍膜看看,
人生中的悲剧太多了
2楼2014-10-03 15:21:44
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巨可爱的小猪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

样本怎么能把膜封闭了呢,就算膜上样本过多,样本也会于抗体特异性结合,使膜曝光更强啊。
3楼2014-10-03 21:13:19
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不会的,下次再做时,把不同的蛋白剪开分别抗就好

[ 发自小木虫客户端 ]
江山
4楼2014-10-04 13:30:13
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样品浓度高的不显色,这应该不是封闭的问题。我倒觉得是检测方法本身的局限,很多方法都只能测低浓度而不能测高浓度,你不妨说说你的方法的检测原理。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-10-04 18:53:09
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wyanyun

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuderong at 2014-10-04 18:53:09
样品浓度高的不显色,这应该不是封闭的问题。我倒觉得是检测方法本身的局限,很多方法都只能测低浓度而不能测高浓度,你不妨说说你的方法的检测原理。

就是在膜上标记多个抗体,然后用生物素标记样本中的蛋白,之后将标记好的样本与膜反应。我也觉得不是封闭的问题,我的对照组样本都出来了,疾病组比对照组样本浓度高了10倍而已。
6楼2014-10-08 15:04:32
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wyanyun

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 巨可爱的小猪 at 2014-10-03 21:13:19
样本怎么能把膜封闭了呢,就算膜上样本过多,样本也会于抗体特异性结合,使膜曝光更强啊。

我也这么觉得,但是确实找不到其他解释了
7楼2014-10-08 15:05:49
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Budaogao

新虫 (小有名气)

封闭久了背景会深,但是浓度高的话反而更好曝光,浓度低应该背景更深才对啊,换一种显色剂试试呢,用用别人的

发自小木虫IOS客户端
8楼2019-01-19 20:28:01
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Budaogao

新虫 (小有名气)

但是不应该让蛋白被封闭啊,如果会这样的话,如何在特异性结合一抗呢,应该不是这个原因吧

发自小木虫IOS客户端
9楼2019-01-19 20:28:59
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