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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，目的条带P出来，但是杂带很多，不懂这是什么情况？求大神帮助。
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小草根1212

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，目的条带P出来，但是杂带很多，不懂这是什么情况？求大神帮助。 已有4人参与

大侠们，marker左边三条目的条带扩增出来了，但是杂带很多，目的条带742bp；PCR条件：94℃ 2min； 94℃ 1min； 56℃ 20s； 72℃ 1min ；35 cycles ；72℃ 5min。请问这是什么问题？

求助，目的条带P出来，但是杂带很多，不懂这是什么情况？求大神帮助。
20150324B1受体.jpg
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1楼 2015-03-24 21:56:51
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
杂带太多提高退火温度，（或者可进行镁离子浓度优化），或者扩增使用热启动聚合酶，可抑制杂带生成
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-03-25 08:53:20
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以提高退火温度试试
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2楼2015-03-24 23:43:03
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以提高退火温度试试，或者先维持56度做几个循环后再提高退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-03-24 23:49:14
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小草根1212: 金币+5, ★有帮助 2015-03-27 19:09:02
所设计引物的特异性不强，重新设计引物吧，用Primer-blast对引物特异性
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5楼2015-03-25 08:54:26
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