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小草根1212

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,目的条带P出来,但是杂带很多,不懂这是什么情况?求大神帮助。 已有4人参与

大侠们,marker左边三条目的条带扩增出来了,但是杂带很多,目的条带742bp;PCR条件:94℃ 2min; 94℃ 1min; 56℃ 20s; 72℃ 1min ;35 cycles ;72℃ 5min。请问这是什么问题?

求助,目的条带P出来,但是杂带很多,不懂这是什么情况?求大神帮助。
20150324B1受体.jpg
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以提高退火温度试试
2楼2015-03-24 23:43:03
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以提高退火温度试试,或者先维持56度做几个循环后再提高退火温度
3楼2015-03-24 23:49:14
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
杂带太多提高退火温度,(或者可进行镁离子浓度优化),或者扩增使用热启动聚合酶,可抑制杂带生成
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-03-25 08:53:20
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小草根1212: 金币+5, 有帮助 2015-03-27 19:09:02
所设计引物的特异性不强,重新设计引物吧,用Primer-blast对引物特异性
5楼2015-03-25 08:54:26
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nemo88

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

6楼2015-03-25 08:59:47
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