24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 5788  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weisuofeng

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊? 已有2人参与

SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊?
我想用BSA做个阳性对照,它的上样量浓度是多少和上多少微升啊?
求帮助啊,各位大神
回复此楼
好好学习
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by weisuofeng at 2015-03-19 12:22:49
你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?...

电泳一般是用来定性的,上多少量其实无所谓,主要是能看到你的蛋白。如果是对照的话,可以配成2mg/ml,然后和2*上样缓冲液混合,上样10μl,这样跑出来的条带大小正好为10μg,可用软件粗略的定量。
需要注意的是,你的上样缓冲液浓度,如果是5*的,对照配成1.25mg/ml。
你的蛋白样品22%,指的是22mg/100ml?这种浓度建议上样20μl,如果不做WB,建议用1.5mm板。还有蛋白浓度请用mg/ml为单位!!!
4楼2015-03-20 09:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。
2楼2015-03-19 11:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weisuofeng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 11:27:16
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。

你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?
好好学习
3楼2015-03-19 12:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 接受任何调剂 +4 也就是栗子 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:57 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 291求调剂 +9 关忆北. 2026-04-14 9/450 2026-04-16 22:49 by cfdbai
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 求助调剂,跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 通信工程求调剂!!! +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
信息提示
请填处理意见