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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS凝胶电泳，我的纯蛋白浓度大约22%左右，上样量我该上多大浓度和上多少样啊？
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weisuofeng

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS凝胶电泳，我的纯蛋白浓度大约22%左右，上样量我该上多大浓度和上多少样啊？ 已有2人参与

SDS凝胶电泳，我的纯蛋白浓度大约22%左右，上样量我该上多大浓度和上多少样啊？
我想用BSA做个阳性对照，它的上样量浓度是多少和上多少微升啊？
求帮助啊，各位大神
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好好学习
1楼 2015-03-19 08:53:25
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by weisuofeng at 2015-03-19 12:22:49
你说的5μg我不是很懂啊，考染，10孔，我应该上样几微升，我一般10微升，你的意思是保证里面有5μg蛋白么？...

电泳一般是用来定性的，上多少量其实无所谓，主要是能看到你的蛋白。如果是对照的话，可以配成2mg/ml，然后和2*上样缓冲液混合，上样10μl，这样跑出来的条带大小正好为10μg，可用软件粗略的定量。
需要注意的是，你的上样缓冲液浓度，如果是5*的，对照配成1.25mg/ml。
你的蛋白样品22%，指的是22mg/100ml？这种浓度建议上样20μl,如果不做WB，建议用1.5mm板。还有蛋白浓度请用mg/ml为单位！！！
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4楼2015-03-20 09:47:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是打算用用什么染色？考然的灵敏度在μg，你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染，0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg，尤其是膜蛋白，否则变性时可能不会太充分。
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2楼2015-03-19 11:27:16
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weisuofeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 11:27:16
你是打算用用什么染色？考然的灵敏度在μg，你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染，0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg，尤其是膜蛋白，否则变性时可能不会太充分。

你说的5μg我不是很懂啊，考染，10孔，我应该上样几微升，我一般10微升，你的意思是保证里面有5μg蛋白么？
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好好学习
3楼2015-03-19 12:22:49
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