24小时热门版块排行榜    

查看: 5751  |  回复: 3

weisuofeng

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊? 已有2人参与

SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊?
我想用BSA做个阳性对照,它的上样量浓度是多少和上多少微升啊?
求帮助啊,各位大神
回复此楼
好好学习
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。
2楼2015-03-19 11:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weisuofeng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 11:27:16
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。

你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?
好好学习
3楼2015-03-19 12:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by weisuofeng at 2015-03-19 12:22:49
你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?...

电泳一般是用来定性的,上多少量其实无所谓,主要是能看到你的蛋白。如果是对照的话,可以配成2mg/ml,然后和2*上样缓冲液混合,上样10μl,这样跑出来的条带大小正好为10μg,可用软件粗略的定量。
需要注意的是,你的上样缓冲液浓度,如果是5*的,对照配成1.25mg/ml。
你的蛋白样品22%,指的是22mg/100ml?这种浓度建议上样20μl,如果不做WB,建议用1.5mm板。还有蛋白浓度请用mg/ml为单位!!!
4楼2015-03-20 09:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weisuofeng 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 316求调剂 +5 梁茜雯 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:26 by 你好你好666
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 13/650 2026-03-20 21:01 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +5 Mqqqqqq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:46 by zhukairuo
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
信息提示
请填处理意见