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weisuofeng

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊? 已有2人参与

SDS凝胶电泳,我的纯蛋白浓度大约22%左右,上样量我该上多大浓度和上多少样啊?
我想用BSA做个阳性对照,它的上样量浓度是多少和上多少微升啊?
求帮助啊,各位大神
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好好学习
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。
2楼2015-03-19 11:27:16
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weisuofeng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 11:27:16
你是打算用用什么染色?考然的灵敏度在μg,你上5μg应该可以很清楚。如果你用银染,0.5-1μg足够。上样的总蛋白浓度不要超过3μg,尤其是膜蛋白,否则变性时可能不会太充分。

你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?
好好学习
3楼2015-03-19 12:22:49
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by weisuofeng at 2015-03-19 12:22:49
你说的5μg我不是很懂啊,考染,10孔,我应该上样几微升,我一般10微升,你的意思是保证里面有5μg蛋白么?...

电泳一般是用来定性的,上多少量其实无所谓,主要是能看到你的蛋白。如果是对照的话,可以配成2mg/ml,然后和2*上样缓冲液混合,上样10μl,这样跑出来的条带大小正好为10μg,可用软件粗略的定量。
需要注意的是,你的上样缓冲液浓度,如果是5*的,对照配成1.25mg/ml。
你的蛋白样品22%,指的是22mg/100ml?这种浓度建议上样20μl,如果不做WB,建议用1.5mm板。还有蛋白浓度请用mg/ml为单位!!!
4楼2015-03-20 09:47:59
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