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有关HPLC中出现的若干小问题～求各路大神解答 已有1人参与
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最近连续购买不同厂家色谱柱（进口），测柱效正常。 但测试重组蛋白样品时，目的峰开始拖尾；而且随着进样针数的增加，拖尾严重。 之前用资生堂的柱子一直测试是没问题的，但是这次购买相同型号的，峰却拖尾严重。 后来，又买了一根赛芬柱子，流动相不过滤，测试重组蛋白样品，峰形正常了。 PS:所有测试的柱压正常；流动相为乙腈和水，梯度洗脱，室温测试，波长为214nm，流速为1ml/min。 究其原因，不知道是什么原因。 1. 请问会不会是滤膜被溶解造成的色谱柱脏掉了。那请问假如是的话，有什么办法将柱子清洁呢，毕竟也是新购置的柱子？ 2. 请问大家所熟知的水相滤膜和有机相滤膜，是怎么区分的呢？我就此问过津腾厂家人员，说聚醚砜材质的滤膜是水系滤膜，那么这样的话，查阅耐受性表，这种水系滤膜是可以耐受乙腈的。而查看网络上资料，一般说的水系滤膜的说法都为只能过滤水。该如何看待？ 3. 请问还有什么其它原因，造成了柱子被损坏的致命伤害呢？ ～～～求各路大神指路明道，谢谢谢谢 |
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wenjia0371: 金币+20, ★有帮助, 5 2015-02-27 16:01:06
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| 如果是过滤液溶解了滤膜，那么是可以目测出来的，溶解了绿滤膜的滤液是浑浊的；水系滤膜只可以滤过水系的溶剂，有机系的滤过有机系以外一般也可以用于滤过水系的，不要光看材质和过分依赖网上查询的东西；如果你怀疑是溶剂污染导致色谱柱效差，注意观察柱压是否严重升高，一般有堵塞的话柱压会升高很快，并注意观察溶剂是否浑浊；关于色谱柱这部分你描述的不多，无法帮你判断，不过你可以咨询色谱柱的相关技术人员，他们更专业。 |
2楼2015-02-27 14:06:36
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4楼2015-02-28 09:47:06
| 楼主有没有试过流动相不变，取少许吐温进液相试一下看峰型是什么样的，个人怀疑是吐温的原因，导致的你说的一系列变化。另外不要拿水系滤膜过率有机溶剂，个人建议，仅供参考。 |
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wenjia03717楼2015-03-02 14:38:25
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