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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 有关HPLC中出现的若干小问题～求各路大神解答
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wenjia0371

银虫 (小有名气)

[求助] 有关HPLC中出现的若干小问题～求各路大神解答已有1人参与

最近连续购买不同厂家色谱柱（进口），测柱效正常。
但测试重组蛋白样品时，目的峰开始拖尾；而且随着进样针数的增加，拖尾严重。
之前用资生堂的柱子一直测试是没问题的，但是这次购买相同型号的，峰却拖尾严重。
后来，又买了一根赛芬柱子，流动相不过滤，测试重组蛋白样品，峰形正常了。
PS:所有测试的柱压正常；流动相为乙腈和水，梯度洗脱，室温测试，波长为214nm，流速为1ml/min。
究其原因，不知道是什么原因。
1. 请问会不会是滤膜被溶解造成的色谱柱脏掉了。那请问假如是的话，有什么办法将柱子清洁呢，毕竟也是新购置的柱子？
2. 请问大家所熟知的水相滤膜和有机相滤膜，是怎么区分的呢？我就此问过津腾厂家人员，说聚醚砜材质的滤膜是水系滤膜，那么这样的话，查阅耐受性表，这种水系滤膜是可以耐受乙腈的。而查看网络上资料，一般说的水系滤膜的说法都为只能过滤水。该如何看待？
3. 请问还有什么其它原因，造成了柱子被损坏的致命伤害呢？
～～～求各路大神指路明道，谢谢谢谢
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1楼2015-02-27 13:43:42
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wenjia0371

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2015-02-28 21:17:07
除了产品本身性质毁柱子以外，你成品里面的添加成分也会对色谱柱造成拖尾效应的。

已经不仅仅是拖尾现象，用两次就几乎没有目的峰出现了。现在不过滤，基本正常。
赞一下 回复此楼
9楼2015-03-03 16:46:30
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wenjia0371: 金币+20, ★有帮助, 5 2015-02-27 16:01:06
如果是过滤液溶解了滤膜，那么是可以目测出来的，溶解了绿滤膜的滤液是浑浊的；水系滤膜只可以滤过水系的溶剂，有机系的滤过有机系以外一般也可以用于滤过水系的，不要光看材质和过分依赖网上查询的东西；如果你怀疑是溶剂污染导致色谱柱效差，注意观察柱压是否严重升高，一般有堵塞的话柱压会升高很快，并注意观察溶剂是否浑浊；关于色谱柱这部分你描述的不多，无法帮你判断，不过你可以咨询色谱柱的相关技术人员，他们更专业。
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我是超级天后：天天努力，不落人后！
2楼2015-02-27 14:06:36
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wenjia0371

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2015-02-27 14:06:36
如果是过滤液溶解了滤膜，那么是可以目测出来的，溶解了绿滤膜的滤液是浑浊的；水系滤膜只可以滤过水系的溶剂，有机系的滤过有机系以外一般也可以用于滤过水系的，不要光看材质和过分依赖网上查询的东西；如果你怀疑 ...

好吧 滤膜问题先这样吧。
溶剂的话，不浑浊，柱压也正常，不过按理来说不会造成不可逆的损坏影响啊。
色谱柱就是买的各种厂家的，有waters, kromasil, 资生堂, 岛津的，都是买的新柱子，在测原液时正常，然后测试成品（添加吐温和聚山梨酸）就开始拖尾，然后再测不管原液还是成品，就越来越严重。
感觉是流动相问题，但又不知道是哪里。
也不知道是不是那么没人品，竟然这么多柱子都不合格？！
您还有什么建议吗？请赐教
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3楼2015-02-27 16:09:17
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mengdragon

木虫 (著名写手)

muchong
应该是你表面活性剂的原因  像离子对试剂或表面活性剂类物质是最毁柱子的
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世界太大，生活的方式很多，关键是你自己有怎样的想法。很多事努力了却不一定会成功，但你放弃了就必然失败，所以就抱着平静的心，努力追求自己的梦！
4楼2015-02-28 09:47:06
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