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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 光用Marker跑胶，拖带现象很严重
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沨1101

金虫 (小有名气)

[求助] 光用Marker跑胶，拖带现象很严重 已有6人参与

用了TBE缓冲液和1%的胶，光跑了Marker，Marker（100，250，500，750，1000，2000bp）出现严重的拖带现象，请问这个现象怎么处理，而且本应该是750条带最亮的，但是最后一条条带反而最亮。请问这是什么原因

光用Marker跑胶，拖带现象很严重
image1222.jpg
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1楼 2015-02-05 11:20:50
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-05 11:41:47
Marker这样，95%是胶的问题，找其他实验室的同学借点试剂来试试吧。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-02-05 11:38:40
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沨1101

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-02-05 11:38:40
Marker这样，95%是胶的问题，找其他实验室的同学借点试剂来试试吧。

和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？
制胶有哪些应该注意的地方？琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物，然后制的胶。
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3楼2015-02-05 11:55:16
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781055707

木虫 (著名写手)
★ ★
沨1101(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:11:49
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沨1101 at 2015-02-05 11:55:16
和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？
制胶有哪些应该注意的地方？琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物，然后制的胶。...

（和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？）这个我用过二蒸水和矿泉水，都没出现过问题。
（琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物）可行。
TBE缓冲液里的硼砂易风化，你这样的结果，最有可能是TBE缓冲液哪里出问题了。琼脂加热至沸腾10秒后取出。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-02-05 12:09:52
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沨1101

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-02-05 12:09:52
（和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？）这个我用过二蒸水和矿泉水，都没出现过问题。
（琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物）可行。
TBE缓冲液里的硼砂易风化，你这样的结果，最有 ...

Tris-硼酸（TBE）
储存液
5X：54g Tris碱
    27.5g硼酸
    20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
一般0.5x使用
我就按照这个配了 不过用了蒸馏水，没用去离子水配
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5楼2015-02-05 12:50:58
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沨1101

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-02-05 12:09:52
（和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？）这个我用过二蒸水和矿泉水，都没出现过问题。
（琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物）可行。
TBE缓冲液里的硼砂易风化，你这样的结果，最有 ...

TBE是昨天新配的，没有沉淀
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6楼2015-02-05 13:06:17
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沨1101 at 2015-02-05 11:55:16
和缓冲液用超纯水稀释还是蒸馏水稀释没有关系吗？
制胶有哪些应该注意的地方？琼脂我是加热好几遍充分溶解，不烫手后加入了EB替代物，然后制的胶。...

为什么琼脂要加热好几遍呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
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有时一本正经，有时胡言乱语。
7楼2015-02-05 23:16:16
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zhylon

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的marker上样时完全解冻没？
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8楼2015-02-06 17:06:50
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linxiqi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
沨1101(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-06 20:49:55
你的MARKER没有问题，因为250的跑的挺好的，琼脂也应该没有问题，因为条带能跑出来，然后问题可能在你的TBE，但我们都是用一乘TAE，所以TBE的实验，没做过。
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活在当下
9楼2015-02-06 18:22:06
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zliean

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
琼脂配胶不能热二遍 再着电压太高也会这样

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2015-02-07 20:46:35
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