应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 表达一个67kd的真菌蛋白，测序结果什么都对，但是蛋白胶跑不出来
101/1返回列表
查看: 1699  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Luna-king

新虫 (小有名气)

[交流] 表达一个67kd的真菌蛋白，测序结果什么都对，但是蛋白胶跑不出来 已有6人参与

求助：我用的是pet-28a（+）载体，在BL21和Rosetta 中都试过，但是都没用，IPTG从0.1mm~1mm都做过，但是都没有东西，这里指的是在SDS-page上和空载比没有明显多出来的条带，请问有人遇到过类似情况吗？有什么解决办法？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-26 12:09:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:19
一你用的哪两个酶切位点？有没有造成移密码？
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现，原因包括大量的稀有密码子的存在等。
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-26 12:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换毕赤酵母吧，真菌蛋白在大肠里面不表达的很多，我就碰到过，换成毕赤酵母就好了
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-01-26 13:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以共转pRARE2试试看。
祝顺利！
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-26 15:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再正常不过的事情了，多找几个载体，换个标签试试，元和不行就真核，全世界都这么干，哪种能表达哪种不能表达没有人知道
赞一下(1人) 回复此楼
不想说什么，，，，
5楼2015-01-26 15:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luna-king

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-01-26 12:31:23
一你用的哪两个酶切位点？有没有造成移密码？
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现，原因包括大量的稀有密码子的存在等。

用的，BamhI 和 NdeI ，阅读框应该没问题，我用毕赤酵母试试吧，感谢。
赞一下 回复此楼
6楼2015-01-27 09:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luna-king

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Allen206 at 2015-01-26 15:15:25
再正常不过的事情了，多找几个载体，换个标签试试，元和不行就真核，全世界都这么干，哪种能表达哪种不能表达没有人知道

哎╮(╯▽╰)╭果然不能偷懒~好吧我重新做毕赤酵母的吧，谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-27 09:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingli513

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
8楼2015-01-27 16:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶晓波1572

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
真要在大肠里表达，也应该先进行一下密码子优化分析
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-14 14:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶晓波1572

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有一个可能，你的真菌蛋白会不会对大肠有毒性，如果有的话，也是很难表达甚至不表达的
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-14 14:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Luna-king 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 14/700 2026-10-16 10:28 by goodluck7111
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+4 纳斯达克ML 2026-10-11 5/250 2026-10-16 10:03 by shjy2599
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+8 David1982 2026-10-13 12/600 2026-10-16 09:50 by shjy2599
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭