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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 表达一个67kd的真菌蛋白，测序结果什么都对，但是蛋白胶跑不出来
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Luna-king

新虫 (小有名气)

[交流] 表达一个67kd的真菌蛋白，测序结果什么都对，但是蛋白胶跑不出来 已有6人参与

求助：我用的是pet-28a（+）载体，在BL21和Rosetta 中都试过，但是都没用，IPTG从0.1mm~1mm都做过，但是都没有东西，这里指的是在SDS-page上和空载比没有明显多出来的条带，请问有人遇到过类似情况吗？有什么解决办法？
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1楼 2015-01-26 12:09:58
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:19
一你用的哪两个酶切位点？有没有造成移密码？
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现，原因包括大量的稀有密码子的存在等。
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2楼2015-01-26 12:31:23
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换毕赤酵母吧，真菌蛋白在大肠里面不表达的很多，我就碰到过，换成毕赤酵母就好了
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3楼2015-01-26 13:46:15
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以共转pRARE2试试看。
祝顺利！
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4楼2015-01-26 15:06:35
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Allen206

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再正常不过的事情了，多找几个载体，换个标签试试，元和不行就真核，全世界都这么干，哪种能表达哪种不能表达没有人知道
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不想说什么，，，，
5楼2015-01-26 15:15:25
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Luna-king

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-01-26 12:31:23
一你用的哪两个酶切位点？有没有造成移密码？
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现，原因包括大量的稀有密码子的存在等。

用的，BamhI 和 NdeI ，阅读框应该没问题，我用毕赤酵母试试吧，感谢。
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6楼2015-01-27 09:30:24
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Luna-king

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Allen206 at 2015-01-26 15:15:25
再正常不过的事情了，多找几个载体，换个标签试试，元和不行就真核，全世界都这么干，哪种能表达哪种不能表达没有人知道

哎╮(╯▽╰)╭果然不能偷懒~好吧我重新做毕赤酵母的吧，谢谢
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7楼2015-01-27 09:32:11
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qingli513

禁虫 (初入文坛)
★
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本帖内容被屏蔽
8楼2015-01-27 16:46:41
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)
★
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真要在大肠里表达，也应该先进行一下密码子优化分析
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9楼2015-04-14 14:32:41
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有一个可能，你的真菌蛋白会不会对大肠有毒性，如果有的话，也是很难表达甚至不表达的
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10楼2015-04-14 14:34:53
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