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Luna-king

新虫 (小有名气)

[交流] 表达一个67kd的真菌蛋白,测序结果什么都对,但是蛋白胶跑不出来 已有6人参与

求助:我用的是pet-28a(+)载体,在BL21和Rosetta 中都试过,但是都没用,IPTG从0.1mm~1mm都做过,但是都没有东西,这里指的是在SDS-page上和空载比没有明显多出来的条带,请问有人遇到过类似情况吗?有什么解决办法?
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Luna-king

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-01-26 12:31:23
一你用的哪两个酶切位点?有没有造成移密码?
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现,原因包括大量的稀有密码子的存在等。

用的,BamhI 和 NdeI ,阅读框应该没问题,我用毕赤酵母试试吧,感谢。
6楼2015-01-27 09:30:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:19
一你用的哪两个酶切位点?有没有造成移密码?
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现,原因包括大量的稀有密码子的存在等。
2楼2015-01-26 12:31:23
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换毕赤酵母吧,真菌蛋白在大肠里面不表达的很多,我就碰到过,换成毕赤酵母就好了
3楼2015-01-26 13:46:15
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以共转pRARE2试试看。
祝顺利!
4楼2015-01-26 15:06:35
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