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表达一个67kd的真菌蛋白,测序结果什么都对,但是蛋白胶跑不出来
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Luna-king
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表达一个67kd的真菌蛋白,测序结果什么都对,但是蛋白胶跑不出来
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求助:我用的是pet-28a(+)载体,在BL21和Rosetta 中都试过,但是都没用,IPTG从0.1mm~1mm都做过,但是都没有东西,这里指的是在SDS-page上和空载比没有明显多出来的条带,请问有人遇到过类似情况吗?有什么解决办法?
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1楼
2015-01-26 12:09:58
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Luna-king
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5楼
:
Originally posted by
Allen206
at 2015-01-26 15:15:25
再正常不过的事情了,多找几个载体,换个标签试试,元和不行就真核,全世界都这么干,哪种能表达哪种不能表达没有人知道
哎╮(╯▽╰)╭果然不能偷懒~好吧我重新做毕赤酵母的吧,谢谢
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7楼
2015-01-27 09:32:11
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lxj341401
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流
2015-01-26 20:13:19
一你用的哪两个酶切位点?有没有造成移密码?
二来自真菌的蛋白不能在大肠杆菌中表达的现象也经常出现,原因包括大量的稀有密码子的存在等。
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2楼
2015-01-26 12:31:23
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换毕赤酵母吧,真菌蛋白在大肠里面不表达的很多,我就碰到过,换成毕赤酵母就好了
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3楼
2015-01-26 13:46:15
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lihe131
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4楼
2015-01-26 15:06:35
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